锌离子在心肌缺血预处理保护机制中的作用

发布时间：2020-08-09 11:00

【摘要】：目的观察缺血预处理(Ischemic Preconditioning,IPC)是否能通过对PERK/Nrf2信号通路的影响,从而保护Wistar大鼠心肌免受缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤,以及锌离子是否参与IPC这一保护机制。方法将50只Wistar大鼠,雄性,250-350 g,随机分成5组(n=10):空白对照组(Control组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血预处理组(I/R+IPC组)、缺血预处理和锌离子螯合剂N,N,N,N-四(2-吡啶甲基)乙二胺(N,N,N,N-tetrakis-(2-pyridylmethyl)ethylenediamine,TPEN)组(I/R+IPC+TPEN组)、缺血再灌注加锌离子螯合剂TPEN组(I/R+TPEN组)。Control组悬挂心脏后只穿线,不结扎血管。I/R组悬挂心脏后稳定20 min,然后在前降支两侧穿线,结扎前降支,缺血30 min,再灌注2 h。I/R+IPC组先进行5 min缺血,5 min再灌注,循环3次,然后缺血30 min,再灌注2 h。I/R+IPC+TPEN组先给予TPEN,5 min之后IPC,然后进行缺血30 min,再灌注2 h。I/R+TPEN组先给予TPEN,5 min之后进行缺血30 min,再灌注2 h。利用锌离子浓度检测试剂盒测定各组大鼠心肌组织内锌离子浓度;应用三苯基氯化四唑(Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)与伊文斯兰(Evans Blue)双染色法检测各组大鼠心肌梗死面积比;用苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色观察各组大鼠组织形态学变化;利用蛋白质印迹(Western blotting)检测各组大鼠心肌中磷酸化蛋白激酶样内质网应激酶(Phosphorylated protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,pPERK)和抗氧化应激蛋白质核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)表达水平;利用免疫组织化学法(immunochemistry)定性分析pPERK、Nrf2蛋白表达情况;应用末端脱氧核苷基转移酶介导的d UTP原位末端标记(Terminal deoxynu-cleotidyl transferase-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)染色法检测各组大鼠心肌组织凋亡指数。结果1锌离子浓度测定:与Control组相比,I/R组在心肌缺血再灌注后组织内锌离子浓度显著降低(P0.05)。与I/R组相比,I/R+IPC组组织内锌离子浓度显著增加(P0.05)。2 TTC与Evans blue双染:与Control组相比,I/R组心肌梗死面积比显著增加(P0.05)。与I/R组相比,I/R+IPC组梗死面积比明显减少(P0.05)。在I/R+IPC+TPEN组,心肌梗死面积比较I/R+IPC组显著增加(P0.05)。3 HE染色:I/R组较Control组心肌组织出现明显心肌纤维排列紊乱、断裂,细胞核溶解,而I/R+IPC组相对于I/R组,心肌组织形态损害明显改善,而这种效应被TPEN逆转。4 Western blot:与Control组相比,I/R组p-PERK、Nrf2两种蛋白表达显著增多(P0.05)。与I/R组相比,I/R+IPC组表达显著减少(P0.05),加入TPEN后两种蛋白表达明显增多(P0.05)。5免疫组织化学:与Control组相比,I/R组心肌细胞中累积光密度(IOD)较高,可见大量棕黄色颗粒。与I/R组相比,I/R+IPC组心肌细胞中累积光密度(IOD)相对较低,棕黄色颗粒显著减少。而I/R+IPC+TPEN组结果与I/R+IPC组相反。6 TUNEL法检测细胞凋亡指数:与Control组相比,I/R组大鼠心肌中的调亡指数(AI)显著增加(35.80±5.310%对5.80±2.864%,P0.05)。而I/R+IPC组中的AI显著低于I/R组中的AI(16.20±4.817%对35.80±5.310%,P0.05)。I/R+IPC+TPEN组中AI相对于I/R+IPC组明显升高(32.60±6.025%对16.20±4.817%,P0.05)。结论1缺血预处理可能通过抑制PERK/Nrf2通路保护心肌。2缺血预处理可能通过锌离子抑制PERK/Nrf2通路,发挥心肌保护作用。图 7 幅;表 3 个;参 206 篇。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R542.2
【图文】：

I/R 组:缺血再灌注组,I/R+IPC 组:缺血预处理组。数据表图 1 缺血预处理对锌离子浓度变化的影响1 Effect of ischemic preconditioning on zinc ion concen表 1 缺血预处理对锌离子浓度变化的影响

I/R 组:缺血再灌注组,I/R+IPC 组:缺血预处理组,I/R+IPC+TPEN I/R+TPEN 组:缺血再灌注加锌离子抑制剂 TPEN 组。图为各组大鼠心肌 3 锌离子在缺血预处理保护机制中对大鼠心肌组织形态学的ffect of zinc on myocardial histomorphology in IPC myocardial p

【参考文献】

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本文编号：2787022