HDAC6降低通过激活内质网应激介导的成骨通路促进主动脉瓣膜钙化
发布时间：2020-08-21 04:40
【摘要】：研究背景:主动脉瓣膜钙化的病理过程包括内质网应激,瓣膜间质细胞(VICs)向成骨样细胞分化,炎症和凋亡,但其机制尚不清楚。HDAC6是HDACⅡb亚族中的一员,在乳腺癌细胞中抑制HDAC6可触发内质网应激。我们首先发现在钙化性主动脉瓣膜疾病患者的主动脉瓣膜组织中,HDAC6表达显著降低。研究已证实内质网应激参与主动脉瓣膜钙化的进展。因此,该论文旨在阐明HDAC6在主动脉瓣膜钙化中的作用和机制。方法及结果:体外应用钙化培养基诱导培养人主动脉瓣膜间质细胞(hVICs),建立主动脉瓣膜钙化的细胞模型。特异性的HDAC6抑制剂Tubacin(10μM)处理hVICs48h,结果显示hVICs的Runx2表达增加。这一结果被HDAC6沉默技术进一步证实,即在hVICs中敲低HDAC6显著增加Runx2的表达。同时我们检测到Tubacin处理hVICs48h后,内质网应激标志蛋白(p-IRE1α、p-PERK、p-eif2α、ATF4)表达增加。应用siRNA技术敲低hVICs的HDAC6后,表现出与Tubacin处理同样的结果,即HDAC6沉默后显著激活内质网应激。牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)在体内和体外被证实是一种经典的内质网应激抑制剂。TUDCA预处理(100 μM)可以显著抑制Tubacin处理或HDAC6沉默诱导的内质网应激信号通路的激活,同时抑制Runx2的表达。ATF4是内质网应激信号通路中重要的成员。敲低ATF4也显著抑制Tubacin处理或HDAC6沉默诱导的Runx2的表达。最后,hVICs分别被转染慢病毒HDAC6 shRNA或者对照组scr shRNA,转染后的hVICs给予TUDCA处理,以无TUDCA处理组为对照组,用钙化诱导培养基培养14天,每3天更换培养基。茜素红染色结果显示,HDAC6敲低使钙结节形成增加,而TUDCA抑制内质网应激后钙结节形成减少。结论:HDAC6降低通过激活内质网应激介导的成骨通路促进主动脉瓣膜钙化。HDAC6对主动脉瓣膜钙化有保护作用,为预防和治疗主动脉瓣膜钙化的提供了可能的新靶点。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.52
【图文】：
为了证实ＨＤＡＣ６是否参与主动脉瓣膜钙化，我们首先观察了邋ＣＡＶＤ和正常逡逑人的主动脉瓣膜组织中ＨＤＡＣ６的表达水平。ＶｏｎＫｏｓｓａ染色证实ＣＡＶＤ的主动脉逡逑瓣膜组织中有明显的钙沉积（图４．１邋Ａ）。免疫俎织化学染色（图４．１Ｂ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ逡逑（图４．１Ｃ）结果显示，ＨＤＡＣ６在钙化的主动脉瓣膜组织中表达显著减少。提示逡逑ＨＤＡＣ６可能参与主动脉瓣膜的钙化。逡逑Ａ逦Ｂ逦ｉ５ｉ逡逑Ｎｏｒｍａｌ逦Ｎｏｒｍａｌ逦＝邋＾邋ｉ逡逑＇逦‘逦．．．逦．一．邋Ｃ邋ｃ邋＾逡逑，：翁！Ｄ５邋■邋＿逡逑＾邋Ｉ邋■邋■逡逑＇令邋ｙ邋？＇邋00Ｌ邋Ｓａｌ邋Ｓ逡逑＿、邋？邋＊邋＇邋■邋．逦、一邋．邋＊邋ｃ逡逑Ｙ逦５０邋ｕｍ逦？，逦５ｔＴａｍ邋＾逦逦逡逑逦±逦邋．１逦逦ｃ逦ＨＤＡＣ６邋垂懰－？逡逑ＣＡＶＤ逦ＣＡＶＤ逦Ｉ逦－］逡逑．，~枺妫海剩稿义襄五五邋五澹危铮颍恚幔戾澹茫粒郑腻义贤迹矗卞澹龋模粒茫对冢茫粒郑牡闹鞫霭昴ぷ橹斜泶锛跎馘义希ǎ粒┱５闹鞫霭昴ぷ橹透苹闹鞫霭昴ぷ橹袂衅郑铮铄义希桑茫铮螅螅崛旧１壤撸海担板澹穑怼＃ǎ拢┱５闹鞫霭昴ぷ橹透苹闹鞫霭昴ぷ殄义现袂衅庖咦橹旧觳猓龋模粒茫叮⑹褂茫桑恚幔纾澹校颍镥澹校欤酰笕砑义辖卸糠治觥＃恚茫粒郑淖楸龋危铮颍恚嶝椤１壤撸海担板澹穑怼＃ǎ茫┱５闹鞫义下霭昴ぷ橹透苹闹鞫霭昴ぷ橹祝澹螅簦澹颍铄澹仑铮簦恚茫粒郑谋
本文编号：2798941
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.52
【图文】：
为了证实ＨＤＡＣ６是否参与主动脉瓣膜钙化，我们首先观察了邋ＣＡＶＤ和正常逡逑人的主动脉瓣膜组织中ＨＤＡＣ６的表达水平。ＶｏｎＫｏｓｓａ染色证实ＣＡＶＤ的主动脉逡逑瓣膜组织中有明显的钙沉积（图４．１邋Ａ）。免疫俎织化学染色（图４．１Ｂ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ逡逑（图４．１Ｃ）结果显示，ＨＤＡＣ６在钙化的主动脉瓣膜组织中表达显著减少。提示逡逑ＨＤＡＣ６可能参与主动脉瓣膜的钙化。逡逑Ａ逦Ｂ逦ｉ５ｉ逡逑Ｎｏｒｍａｌ逦Ｎｏｒｍａｌ逦＝邋＾邋ｉ逡逑＇逦‘逦．．．逦．一．邋Ｃ邋ｃ邋＾逡逑，：翁！Ｄ５邋■邋＿逡逑＾邋Ｉ邋■邋■逡逑＇令邋ｙ邋？＇邋00Ｌ邋Ｓａｌ邋Ｓ逡逑＿、邋？邋＊邋＇邋■邋．逦、一邋．邋＊邋ｃ逡逑Ｙ逦５０邋ｕｍ逦？，逦５ｔＴａｍ邋＾逦逦逡逑逦±逦邋．１逦逦ｃ逦ＨＤＡＣ６邋垂懰－？逡逑ＣＡＶＤ逦ＣＡＶＤ逦Ｉ逦－］逡逑．，~枺妫海剩稿义襄五五邋五澹危铮颍恚幔戾澹茫粒郑腻义贤迹矗卞澹龋模粒茫对冢茫粒郑牡闹鞫霭昴ぷ橹斜泶锛跎馘义希ǎ粒┱５闹鞫霭昴ぷ橹透苹闹鞫霭昴ぷ橹袂衅郑铮铄义希桑茫铮螅螅崛旧１壤撸海担板澹穑怼＃ǎ拢┱５闹鞫霭昴ぷ橹透苹闹鞫霭昴ぷ殄义现袂衅庖咦橹旧觳猓龋模粒茫叮⑹褂茫桑恚幔纾澹校颍镥澹校欤酰笕砑义辖卸糠治觥＃恚茫粒郑淖楸龋危铮颍恚嶝椤１壤撸海担板澹穑怼＃ǎ茫┱５闹鞫义下霭昴ぷ橹透苹闹鞫霭昴ぷ橹祝澹螅簦澹颍铄澹仑铮簦恚茫粒郑谋
本文编号：2798941
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