吸烟对大鼠NLRP3炎症小体信号通路的影响

发布时间：2020-08-23 12:18

【摘要】：目的:探究吸烟对大鼠NLRP3炎症小体信号通路的影响,以及褪黑素的保护效果,并探讨NLRP3炎症小体在吸烟导致动脉粥样硬化中的作用。方法:15只清洁级SD雄性大鼠,鼠龄6-8周,体重300±10g,随机分为3组,每组5只:对照组(C组)、吸烟组(S组)、吸烟+褪黑素组(M组)。三组均给予标准饲料喂养。S组及M组每日10点-12点,14点-16点两个时段置于烟熏笼内烟熏,每时段各吸入20支点燃香烟。总计每日接受烟熏时间4小时,每日接受40支香烟吸入。M组在每日接受烟熏之前,腹腔注射褪黑素20mg/kg;C组及S组在每日接受烟熏之前,腹腔注射等量载液。持续1周。喂养1周后,麻醉动物,腹主动脉取血,并分离获取腹主动脉。将腹主动脉迅速置于-80℃冰箱中保存,用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测腹主动脉组织中NLRP3mRNA的表达水平,以及用WesternBlot检测腹主动脉组织中NLRP3、ASC、IL-1β、caspase-1的表达水平。动脉血离心分离血浆,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血浆IL-1β、IL-18、MCP-1水平。剩余血液作适当稀释,密度梯度离心法分离大鼠外周血单个核细胞(PBMC),WesternBlot检测PBMC中NLRP3、caspase-1的表达水平。采用单因素方差分析比较三组间蛋白及mRNA水平的差异。结果:1.血浆炎症因子情况:与C组相比,S组血浆IL-1β水平显著升高(p0.001),IL-18水平显著升高(p0.0001),MCP-1水平明显升高(p0.01)。与S组相比,M组血浆IL-1β水平显著降低(p0.001),IL-18水平显著降低(p0.0001),MCP-1 水平较低(p0.05,p0.1)。2.PBMC 中 NLRP3、caspase-1 蛋白的表达:与 C组相比,S组NLRP3、caspase-1表达明显增多(p0.05)。M组与S组相比无显著性差异。3.腹主动脉组织NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β蛋白的表达:与C组相比,S组NLRP3、IL-1β表达明显增多(p0.05),caspase-1、ASC表达较多,但无统计学差异(p0.05)。与S组相比,M组NLRP3、caspase-1、IL-1β表达明显降低(p0.05)。4.腹主动脉组织NLRP3mRNA的表达:与C组相比,S组NLRP3mRNA表达明显升高(p0.05),而M组则明显低于S组(p0.05)。结论:吸烟可导致大鼠外周血单个核细胞及主动脉组织NLRP3炎症小体表达的增加,血浆中NLRP3炎症小体下游炎症因子IL-1β、IL-18及血浆MCP-1的水平升高。吸烟可能通过激活单核细胞NLRP3炎症小体信号通路,促进单核细胞募集,引起血管炎症损伤,导致动脉粥样硬化。褪黑素可能通过抑制NLRP3炎症小体信号通路对吸烟导致的血管炎症损伤发挥保护作用。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.5
【图文】：

各组大鼠血浆ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－１８、ＭＣＰ－１表达水平逡逑大鼠血浆ＩＬ－１Ｐ表达水平逡逑通过检测三组大鼠血浆ＩＬ－ｌｐ含量，发现Ｓ组大鼠血浆ＩＬ－ｌｐ水平显著高（ｐ＜０．００１）。相比于单纯吸烟组，Ｍ组大鼠经褪黑素干预，血浆ＩＬ－１（３水平低于Ｓ组（ｐ＜０．００１）。Ｍ组和Ｃ组之间无统计学差异。具体见表３及图１。逡逑表３各组大鼠血浆ＩＬ－ｉｐ蛋白水平（妇：ｓ）逦逡逑组别逦Ｍｍ逦ＩＬ－ｌｐ邋（ｐｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ逦５逦４２．３５±２１．０２逡逑Ｓ逦５逦４０９２．２７±１８９７．３４逡逑Ｍ逦５逦３３１．６９±１２５．６６逡逑

检测三组大鼠血浆ＩＬ－１８含量发现，Ｓ组大鼠血浆ＩＬ－１８水平显著高于Ｃ组，逡逑差异具有统计学意义（ｐ＜0．000ｌ）。Ｍ组大鼠血浆ＩＬ－１８水平显著低于Ｓ组（ｐ＜逡逑０．０００１）。Ｍ组和Ｃ组之间无统计学差异。具体见表４及图２。逡逑表４各组大鼠血浆ＩＬ－１８蛋白水平（无士ｓ）逦逡逑组别逦例数逦ＩＬ－１８邋（ｐｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ逦５逦２６．９４±４．０４逡逑Ｓ逦５逦６５．３１±４．３２逡逑Ｍ逦５逦２４．３９±８．０１逡逑＊邋＊邋＊邋★逦＊邋＊邋＊邋＊逡逑８0邋ｒ邋，逦逦逦，逡逑Ｉ逦１１逦Ｉ逡逑６０邋■逡逑■逡逑Ｂ逦４０逦－逦ＨＨｍ逡逑：：ｈ邋■工逡逑■逡逑ｏ逦——ｉ—逦＾逦Ｌ＿ｒ＂＿邋—逡逑Ｏ逦＜ｂ逡逑图２各组大鼠血浆ＩＬ－１８水平逡逑注：ＥＬＩＳＡ检测各组大鼠血浆ＩＬ－１８水平。Ｃ：对照组；Ｓ：吸烟组；Ｍ：吸烟＋褪逡逑黑素组。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。逡逑１８逡逑

检测三组大鼠血浆ＭＣＰ－１含量发现，Ｓ组大鼠血浆ＭＣＰ－１水平显著高于Ｃ组逡逑（ｐ＜０．０１邋组大鼠血浆ＭＣＰ－１水平较低于Ｓ组，但差异不具有统计学意义（０．０５逡逑＜ｐ＜０．１）。Ｍ组和Ｃ组之间无统计学差异。具体见表５及图３。逡逑表５各组大鼠血浆ＭＣＰ－１蛋白水平（无土ｓ）逦逡逑组另邋ＩＩ逦＾逦ＭＣＰ－１邋（ｐｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ逦５逦２５１．３５±３１．７７逡逑Ｓ逦５逦３７５．３３±５０．６１逡逑Ｍ逦５逦２９２．６７±６７．０７逡逑＊邋★逡逑５００「逦，逦，逡逑４００邋－逦｜逡逑＿逦Ｔ逡逑Ｄ）逦■逦＿＿＿逦Ｉ逦，逡逑２００逦．逦Ｈ逡逑■逡逑１００邋■逡逑０邋邋邋１邋逦＾逦逦ｒ邋邋逦逡逑图３各组大鼠血浆ＭＣＰ＿１水平逡逑注：ＥＬＩＳＡ检测各组大鼠血浆ＭＣＰ－１水平。Ｃ：对照组；Ｓ：吸烟组；Ｍ：吸烟＋褪逡逑黑素组。＊＊ｐ＜０．０１。逡逑１９逡逑

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本文编号：2801520