IgE通过lincRNA-p21影响主动脉平滑肌衰老促进腹主动脉瘤
发布时间：2020-09-16 07:54
腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)多发于50岁以上的老年男性,是腹主动脉壁局部异常扩张或膨胀超过正常血管直径50%的一种病理状态,最终血管壁无法承受血流的冲击而破裂,导致患者突然大量失血而死亡,病死率高,除高风险的外科手术外尚无切实有效的治疗方法,预后极差,因此,深入探讨腹主动脉瘤发病机制,寻找其防治方法显得尤为重要。免疫球蛋白E(IgE)通过与肥大细胞和嗜碱性粒细胞结合从而激活I型超敏反应,众所周知,IgE及其受体FcεRI在过敏性哮喘导致的的气道炎症和重塑中发挥至关重要的作用。我们的前期研究发现,AAA患者血浆中免疫球蛋白E(IgE)含量显著升高,最近有研究表明,IgE在腹主动脉瘤的发病机制中也起着重要作用。然而,IgE促进AAA发生发展的具体机制目前尚不清楚。本课题研究发现,哮喘诱导小鼠IgE升高并加重了小鼠AAA形成,敲除FcεRI明显减轻由哮喘加重的小鼠AAA直径、发生率、弹性板断裂和AAA局部及全身性炎症反应,并检测到敲除FcεRI可以明显缓解AAA组织衰老及p21表达。体外研究表明,人主动脉平滑肌细胞(HASMC)表达IgE受体FcεRI,并且IgE刺激可使平滑肌p21表达量显著升高,同时不影响p53表达量,并可以明显促进平滑肌衰老,而敲低长非编码RNA:lincRNA-p21则可抑制IgE诱导的p21表达升高和HASMC衰老。动物实验证实,敲低小鼠lincRNA-p21可有效减缓哮喘加重的AAA,并降低瘤组织中p21表达减轻细胞衰老。本研究首次发现了哮喘诱导的高IgE能够通过lincRNAp21-p21通路促进平滑肌衰老,从而加重AAA形成,为哮喘加重AAA的诊断和潜在治疗靶点提供新的实验依据。
【学位单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R543.1
【部分图文】：
哮喘与腹主动脉瘤之间的关系，我们建立小鼠哮喘并发腹主动脉瘤动物模型，采用逡逑Ａｎｇｌｌ诱导ＡｐｏＥ＿Ａ小鼠法建立腹主动脉瘤模型的同时，用卵清蛋白（ＯＶＡ）诱导建逡逑立小鼠过敏性哮喘模型（图１Ａ）。如图１Ｂ－Ｆ所示，与ＰＢＳ雾化暴露对照组相比，逡逑ＯＶＡ诱导哮喘组小鼠（哮喘组）的支气管肺泡灌洗液（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ邋ｌａｖａｇｅ邋ｆｌｕｉｄｓ，逡逑ＢＡＬＦ）中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量显着增加，哮喘组小鼠血清中ＯＶＡ特异逡逑性ＩｇＥ含量也显著升高，胶原纤维染色证实，哮喘组小鼠肺组织胶原纤维的形成较逡逑对照组明显增多，并且哮喘组小鼠肺组织小血管周围炎性细胞的浸润较对照组显著逡逑增加，以上实验结果表明ＯＶＡ诱导建立小鼠过敏性哮喘模型成功。在敲除小鼠ＩｇＥ逡逑受体ＦｃｅＲＩ邋（ＡｐｏＥ＋，邋ＦｃｅＲＴＭ、＿）再接受ＯＶＡ诱导哮喘（实验组）后，支气管肺逡逑泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量较哮喘组明显下降，血清中ＯＶＡ特异逡逑性ＩｇＥ含量、肺组织胶原纤维及肺组织小血管周围炎性细胞浸润都比哮喘组小鼠显逡逑著减少。说明ＩｇＥ受体ＦｃｅＲＩ在小鼠过敏性哮喘发病进程中具有重要病理作用。逡逑对小鼠进行哮喘并发ＡＡＡ建模后解剖小鼠观察其主动脉成瘤情况
逑除炎症外，血管壁细胞的衰老和凋亡在血管重塑中也起着至关重要的作用［５３R%。逡逑因此我们使用ＴＵＮＥＬ染色观察三组小鼠ＡＡＡ组织中的细胞凋亡情况，如图２Ｋ所逡逑示，哮喘显著增加了邋ＡＡＡ小鼠瘤组织壁中凋亡细胞的数量，特别是增加了组织中逡逑平滑肌凋亡细胞的数量（图２Ｌ），而敲除ＦｃｅＲＩ后由哮喘造成的组织细胞凋亡增加逡逑明显回落。并且通过Ｐ－半乳糖苷酶（ＳＡ－ｐ－ｇａｌ）衰老组织化学染色发现，与没有哮喘的逡逑ＡＡＡ单发小鼠相比，哮喘并发ＡＡＡ小鼠的主动脉瘤组织衰老更为严重（图２Ｍ和逡逑Ｎ）而哮喘同样未能显著加重ＡｐｏＥ＇邋ＴｃｅＲｒ邋－小鼠ＡＡＡ组织中的细胞凋亡和衰老（图逡逑２Ｋ－Ｎ）。以上结果表明，ＩｇＥ能够通过促进腹主动脉壁细胞的衰老和凋亡从而加重小逡逑鼠ＡＡＡ发生发展。逡逑Ａ逦Ｂ逦Ｃ逦Ｄ逡逑５０＾邋——逦４００邋＊逦０．１５－邋＊邋邋邋＾邋？邋——邋口邋ＰＢＳＡｐｏＥ’逡逑Ｃ邋＿逦＊逦ｃ逦－ｒ逦ｘ逦Ｉ邋逦＾邋ＢＯＶＡＡｐｏＥ－逡逑ｉ邋ＩＩ３００邋ｉ邋ｉ邋ｊｉ，邋｜邋ＢＯＶＡＡｐｏ？＂逡逑ｆ４Ｌ邋〖ｉ：ｎＬ邋ｆｃｆｉｌｉ逡逑Ｅ逦Ｆ逦Ｇ逦Ｈ逦？，逡逑？逦１．０ｉ邋？邋邋邋邋８ｉ逦；＾３０ｊ邋邋逡逑Ｈ４＇邋￣ｒ逦ｉｉ邋＾逦Ｌ邋｜逡逑‘逦■Ｍｍ逦‘逦ｉｔＬ逡逑１逦＾逦Ｋ逦Ｌ逡逑８０］邋——１１—逦一邋１00ｌ逦逦邋Ｈ邋４
逑细胞，ＳＡ－（３－ｇａｌ衰老染色结果表明，ＩｇＥ与Ａｎｇｌｌ相同都能够促使平滑肌显著衰老，逡逑（图３Ｃ，邋Ｄ）。ｐ２１，也称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂１邋（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ逡逑ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ邋１）是细胞衰老的经典标志物，也是代表其上游因子ｐ５３活性的重要靶因子，逡逑对丨ｇＥ刺激后的平滑肌细胞的检测发现，ＩｇＥ刺激可以显着上调平滑肌细胞ｐ２１的逡逑ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达量，然而ｐ５３的ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达量却没有显著逡逑差异（图３Ｅ－Ｇ）。于是在小鼠组织上加以验证发现，与对照组相比，哮喘引发高ＩｇＥ逡逑组小鼠的腹主动脉瘤组织ｍＲＮＡ水平上同样出现ｐ２１表达显著增高而ｐ５３的表达逡逑量没有显著统计学差异现象（图３Ｈ，Ｉ），并且免疫组化染色结果显示，哮喘小鼠腹主逡逑动脉瘤组织ｐ２１蛋白水平较对照组明显增多图３Ｊ，Ｋ）。这些发现表明，ＩｇＥ在体外和逡逑体内都能够诱发主动脉血管平滑肌发生衰老。逡逑Ａ逦Ｂ逦Ｃ逡逑８－１逦４０邋ｎ逡逑
本文编号：2819596
【学位单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R543.1
【部分图文】：
哮喘与腹主动脉瘤之间的关系，我们建立小鼠哮喘并发腹主动脉瘤动物模型，采用逡逑Ａｎｇｌｌ诱导ＡｐｏＥ＿Ａ小鼠法建立腹主动脉瘤模型的同时，用卵清蛋白（ＯＶＡ）诱导建逡逑立小鼠过敏性哮喘模型（图１Ａ）。如图１Ｂ－Ｆ所示，与ＰＢＳ雾化暴露对照组相比，逡逑ＯＶＡ诱导哮喘组小鼠（哮喘组）的支气管肺泡灌洗液（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ邋ｌａｖａｇｅ邋ｆｌｕｉｄｓ，逡逑ＢＡＬＦ）中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量显着增加，哮喘组小鼠血清中ＯＶＡ特异逡逑性ＩｇＥ含量也显著升高，胶原纤维染色证实，哮喘组小鼠肺组织胶原纤维的形成较逡逑对照组明显增多，并且哮喘组小鼠肺组织小血管周围炎性细胞的浸润较对照组显著逡逑增加，以上实验结果表明ＯＶＡ诱导建立小鼠过敏性哮喘模型成功。在敲除小鼠ＩｇＥ逡逑受体ＦｃｅＲＩ邋（ＡｐｏＥ＋，邋ＦｃｅＲＴＭ、＿）再接受ＯＶＡ诱导哮喘（实验组）后，支气管肺逡逑泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞的数量较哮喘组明显下降，血清中ＯＶＡ特异逡逑性ＩｇＥ含量、肺组织胶原纤维及肺组织小血管周围炎性细胞浸润都比哮喘组小鼠显逡逑著减少。说明ＩｇＥ受体ＦｃｅＲＩ在小鼠过敏性哮喘发病进程中具有重要病理作用。逡逑对小鼠进行哮喘并发ＡＡＡ建模后解剖小鼠观察其主动脉成瘤情况
逑除炎症外，血管壁细胞的衰老和凋亡在血管重塑中也起着至关重要的作用［５３R%。逡逑因此我们使用ＴＵＮＥＬ染色观察三组小鼠ＡＡＡ组织中的细胞凋亡情况，如图２Ｋ所逡逑示，哮喘显著增加了邋ＡＡＡ小鼠瘤组织壁中凋亡细胞的数量，特别是增加了组织中逡逑平滑肌凋亡细胞的数量（图２Ｌ），而敲除ＦｃｅＲＩ后由哮喘造成的组织细胞凋亡增加逡逑明显回落。并且通过Ｐ－半乳糖苷酶（ＳＡ－ｐ－ｇａｌ）衰老组织化学染色发现，与没有哮喘的逡逑ＡＡＡ单发小鼠相比，哮喘并发ＡＡＡ小鼠的主动脉瘤组织衰老更为严重（图２Ｍ和逡逑Ｎ）而哮喘同样未能显著加重ＡｐｏＥ＇邋ＴｃｅＲｒ邋－小鼠ＡＡＡ组织中的细胞凋亡和衰老（图逡逑２Ｋ－Ｎ）。以上结果表明，ＩｇＥ能够通过促进腹主动脉壁细胞的衰老和凋亡从而加重小逡逑鼠ＡＡＡ发生发展。逡逑Ａ逦Ｂ逦Ｃ逦Ｄ逡逑５０＾邋——逦４００邋＊逦０．１５－邋＊邋邋邋＾邋？邋——邋口邋ＰＢＳＡｐｏＥ’逡逑Ｃ邋＿逦＊逦ｃ逦－ｒ逦ｘ逦Ｉ邋逦＾邋ＢＯＶＡＡｐｏＥ－逡逑ｉ邋ＩＩ３００邋ｉ邋ｉ邋ｊｉ，邋｜邋ＢＯＶＡＡｐｏ？＂逡逑ｆ４Ｌ邋〖ｉ：ｎＬ邋ｆｃｆｉｌｉ逡逑Ｅ逦Ｆ逦Ｇ逦Ｈ逦？，逡逑？逦１．０ｉ邋？邋邋邋邋８ｉ逦；＾３０ｊ邋邋逡逑Ｈ４＇邋￣ｒ逦ｉｉ邋＾逦Ｌ邋｜逡逑‘逦■Ｍｍ逦‘逦ｉｔＬ逡逑１逦＾逦Ｋ逦Ｌ逡逑８０］邋——１１—逦一邋１00ｌ逦逦邋Ｈ邋４
逑细胞，ＳＡ－（３－ｇａｌ衰老染色结果表明，ＩｇＥ与Ａｎｇｌｌ相同都能够促使平滑肌显著衰老，逡逑（图３Ｃ，邋Ｄ）。ｐ２１，也称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂１邋（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ逡逑ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ邋１）是细胞衰老的经典标志物，也是代表其上游因子ｐ５３活性的重要靶因子，逡逑对丨ｇＥ刺激后的平滑肌细胞的检测发现，ＩｇＥ刺激可以显着上调平滑肌细胞ｐ２１的逡逑ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达量，然而ｐ５３的ｍＲＮＡ及蛋白水平的表达量却没有显著逡逑差异（图３Ｅ－Ｇ）。于是在小鼠组织上加以验证发现，与对照组相比，哮喘引发高ＩｇＥ逡逑组小鼠的腹主动脉瘤组织ｍＲＮＡ水平上同样出现ｐ２１表达显著增高而ｐ５３的表达逡逑量没有显著统计学差异现象（图３Ｈ，Ｉ），并且免疫组化染色结果显示，哮喘小鼠腹主逡逑动脉瘤组织ｐ２１蛋白水平较对照组明显增多图３Ｊ，Ｋ）。这些发现表明，ＩｇＥ在体外和逡逑体内都能够诱发主动脉血管平滑肌发生衰老。逡逑Ａ逦Ｂ逦Ｃ逡逑８－１逦４０邋ｎ逡逑
本文编号：2819596
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