联合测定炎症因子水平与冠状动脉易损斑块相关性的研究

发布时间：2020-10-13 07:07

　　 研究的背景：在动脉粥样硬化的发生和发展的过程中,急性心血管综合征是其常见的急性心血管意外事件。心肌梗死,是不稳定动脉粥样硬化斑块表面侵蚀破裂引致。循环单细胞数在冠脉内的易损斑块能够选择性的增加并被诱导其表型改变,促使其迁移到动脉粥样硬化斑块,并使其病灶破裂。在动脉粥样硬化中单核细胞分化成巨噬细胞,树突状细胞以及T细胞迁移到内皮下的区域来应答炎症反应。因此炎症反应在动脉粥样硬化中以及冠脉斑块易损中起着至关重要的作用。研究表明动脉粥样硬化与巨噬细胞的分化、斑块的稳定性、血栓的形成密切相关,同时也有研究表明,冠状动脉粥样硬化始发于血管内皮细胞功能障碍和炎症反应,其中包括许多炎症因子如：IL-1β、IL-6、IL=18及TNF-α;基质金属蛋白质MMP-9；趋化因子：MCP-1、IL-8;细胞粘附分子：ICAM-1、VCAM-1;E-选择素；P-选择素。目前对于生物学标志物的检测多数采用的是外周静脉或股动脉鞘采血进行评价炎症因子与ACS的相关性。由于外周血的干扰因素较多,而使各种因子水平的高低并不能准确的反应局部冠脉病变程度及斑块易损的程度。研究目的：为了找出高灵敏高特异性的预测斑块破裂和急性心血管事件的标志物,我们采用了在冠状动脉造影的同时采集冠脉血或PCI时采用DjverCE血栓抽吸导管采血检测各类生物标记物的表达水平,并评估何种因子可以作为评价动脉粥样硬化疾病和易损斑块的特异性标志物。研究方法：1.冠状动脉粥样硬化性心脏病患者冠脉局部采血检测NF-κB;hs-CRP和Lp-PLA2水平1.1选取疑似为冠心病的患者而入院行择期CAG术的患者105人。所有患者在进行CAG时采集冠脉血或PCI时DiverCE血栓抽吸导管采血。ELISA方法分别检测冠脉局部血中NF-κB, hs-CRP和Lp-PLA2浓度水平。1.2比较CAD亚分组UAP和SAP以及健康对照组冠脉局部采血中NF-κB和hs-CRP和Lp-PLA2水平。1.3 Pearson相关性分析在UAP和SAP分组中NFκB (p65)、hs-CRP、Lp-PLA2的相关性。1.4用ROC曲线分析NF-κB、hs-CRP诊断UAP的效能。2. NF-κB对能够作为评价冠脉易损的生物学指标的调控作用采用不同的NF-κB浓度梯度(空白,50ng/l,100ng/l,500ng/l,1000ng/l)刺激THP-1巨噬细胞,12小时和24小时取细胞上清。在另一实验中,PTDC(终浓度10umol/1)预处理THP-1巨噬细胞30分钟,然后再加入终浓度为500ng/l的NF-κB刺激24小时,取细胞上清。采取各组细胞上清液分别以ELISA法检测其中IL-1β; IL-6;IL-18; TNF-α; MMP-9的浓度。分别以不同的NF-κB浓度(空白,50ng/l,100ng/l, 500ng/l和1000ng/l)刺激HUEVCs 12小时和24小时,ELISA法检测细胞培养上清液中MCP-1和IL-8浓度。ELISA法检测内皮细胞表面ICAM-1; VCAM-1; E-selectin和P-selectin的表达。在Transwell实验中,上室中加入密度为2×105个/ml的THP-1单核细胞,在下室中加入不同浓度梯度的NF-κB(空白,50ng/l,100ng/l,500ng/l和1000ng/l),放入37℃5%C02的细胞培养箱,孵育30分钟,取出并弃掉上室培养基,采用4%多聚甲醛固定,苏木素染色,光学显微镜下随机选取5个高倍镜视野计数。另外,在单独的实验中,个别实验组在下室中预先加入NF-κB中和抗体(终浓度20ug/ml),然后再加入终浓度为500ng/l的NF-κB,细胞培养箱内37℃,5%C02孵育30分钟,按照上述步骤染色计数。研究结果：1.CAD患者组的NFκB (p65); Lp-PLA2; hs-CRP的水平显著高于正常对照组,对照组和CAD患者组NFKB(p65)的水平分别为89.92±9.67ng/ml vs 477.77 ±108.63ng/ml, P0.001。正常对照组与CAD患者组中的Lp-PLA2的水平分别为12.31±5.17IU/mLvs18.00±6.22IU/mL, P0.05。hs-CRP的水平在CAD患者和对照组的血清中的水平分别为4.90±0.97mg/l vs 1.84±0.35mg/l, P0.0035。2.亚组分析中,UAP组和SAP组与健康对照组相比较,NFκB(p65); Lp-PLA2; hs-CRP的浓度水平均有显著升高,尤其以UAP组最为显著。SAP组的NFκB(p65)水平为345.2±96.30 ng/1, UAP组的NFκB (p65)水平为565.0±128.1ng/l,健康对照组的水平为98.9±44.9 ng/l(P0.001)。SAP组的Lp-PLA2水平15.23±7.38 IU/ml, UAP组的Lp-PLA2水平为19.87±8.12IU/ml,健康对照组的水平为12.89±6.15 IU/ml (P0.001)。UAP组的hs-CRP的水平为6.62 ±13.24mg/l; SAP组的hs-CRP的水平为2.43±3.31mg/l；对照组的的水平为1.85±1.68mg/l (P0.001).3.在UAP患者中NFκB (p65)与hs-CRP的水平有显著的正相关(r=0.473,P=0.001)。但在SAP患者中,NFκB (p65)与hs-CRP的水平的相关性却无统计学意义(r=0.287,P=0.185)。在UAP和SAP患者中Lp-PLA2的水平与NFκB(p65)和hs-CRP的水平均不相关。这一研究结果表明在采用DiverCE血栓抽吸导管采血测定生物标记物的方法中,NFκB (p65)与hs-CRP可能成为评价和诊断UAP的生物学指标。4.在本研究的冠心病患者中,DiverCE血栓抽吸导管采血的血清中NFκB (p65)水平在诊断UAP方面比hs-CRP准确性高。NFκB (p65)的ROC分析曲线下面积为0.93 (95% CI:0.89-0.97, P0.001); hs-CRP的ROC分析曲线下面积为0.80(95% CI：0.69-0.89,P0.001)。由此我们可以得出在诊断UAP方面NFκB (p65)比hs-CRP更具精确度。继续计算NFκB (p65) AUC-hs-CRP AUC=0.145,P=0.002)我们得出,本研究中NFκB (p65)浓度在427.6 ng/l可以作为诊断UAP的参考值(cutoff-value),此时血清NFκB (P65)诊断UAP的灵敏性和特异性分别为85.5%和82.8%。5.在THP-1巨噬细胞中,随着NFκB (p65)刺激浓度的逐渐升高,细胞上清中1L-1β; IL-6; IL-18; TNF-α; MMP-9的浓度水平相应增高,在刺激24小时这种效应最显著。NFκB (p65)抑制剂PTDC(10umol/l)可以显著抑制甚至完全消除NFκB (p65) (500ng/l)诱导的THP-1巨噬细胞上清中IL-1β; IL-6; IL-18; TNF-α; MMP-9的分泌(P0.05)。6.在THP-1巨噬细胞中,随着NFκB(p65)刺激浓度的逐渐升高,THP-1巨噬细胞上清中分泌的MCP-1和IL-8随之增加。NFκB (p65)能够浓度依赖性的诱导HUEVCs表面ICAM-1的表达。NFκB (p65)对于VCAM-1的调控也具有类似的趋势,应用不同浓度的NFκB (p65)刺激HUEVCs,细胞蛋白中E-selectin的浓度水平随着NFκB (p65)浓度的升高而升高。同样的,]HUEVCs中P-selectin的分泌也具有NFκB (p65)浓度的依赖性。7. Transwel实验的结果表明,不同浓度的(从50ng/Γ-1000ng/l) NFκB (p65)核转录因子对THP-1单核细胞化学趋化活性均显著(P0.05)。NFκB (p65)中和抗体(终浓度20ug/ml)加入Transwell下室中则能够完全阻断NFκB (p65)(500ng/l)诱导的THP-1细胞趋化(P0.05)。结论：1. DiverCE血栓抽吸导管采取的血液中NFκB (p65)、hs-CRP和Lp-LPA2在动脉粥样硬化斑块内局部上调,并在UAP和SAP患者中均表达上调,UAP组高于SAP组。2. NFκB(P65)在THP-1巨噬细胞中可以调控炎症因子IL-1β;IL-6;IL-18;TNF-α;的表达。3. NFκB(P65)在HUVECs中可以诱导血管内皮细胞化学趋化因子(IL-8.MCP-1)和粘附分子(E-seletin、P-seletin、VCAM-1和ICAM-1)的分泌和表达,加强单核细胞的化学趋化以及调控单核／巨噬细胞基质蛋白酶MMP-9的分泌等机制,活化血管内皮细胞和单核／巨噬细胞,增强炎症反应和细胞外基质的降解,参与了动脉粥样硬化和斑块的去稳定性过程。4. NFκB(p65)可以作为一个预测不稳定型心绞痛患者短期预后的生物学指标。5.NFκB (p65)可作为冠心病治疗的一个新靶点。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R543.5
【部分图文】：

图１寇脉局部采血冠屯病患者与健康对照组血液中ＮＦｋＢ?（ｐ６５）?；?Ｌｐ－ＰＬＡ２和ｈｓ－Ｃ民Ｐ的水??平比较。??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｓｅｒｕｍ?ｏｆ?ＤｉｖｅｒＣＥ?化ｋｅ?ｂｌｏｏｄ?ｔｈｒｏｍｂｕｓ?ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ?ｃａ化ｅｔｅｒ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆＮＦｉｃＢ?（ｐ６５）?（Ａ）；??Ｌｐ－ＰＬＡ＞２（Ｂ）?ａ打ｄ?ｈｓ－ＣＲＰ（Ｃ）?ｉ打?ｐａｔｉｅ打ｔｓ?ｗｉｔｈ?ＣＡＤ?ａ打ｄ?ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌ?ｉ打?ｓｅｒｕｍ．??

ＮＦｋＢ?（ｐ６５）的浓度水平均有显著升高，尤其Ｗ?ＵＡＰ姐最为显著。ＳＡＰ组的ＮＦｋＢ??（ｐ６５?）水平为?３４５．２?±?９６．３０?ｎｇ／１，ＵＡＰ?组的?ＮＦｋＢ?（ｐ６５）水平为?５６５．０?±?１２８．ｌｎｇ／１，??健康对照组的水平为９８．９±?４４．９?ｎｇ／１，ＰＯ．ＯＯｌ）。结果如图２所示。??３２??

清中ＬＰ－ＰＬＡ２水平均有显著升高，尤其ＵＡＰ组最为显著。ＳＡＰ组的ＬＰ－ＰＬＡ２??水平?１５．２３?＋?７．３８?ｌＵ／ｍｌ，ＵＡＰ?组的?Ｌｐ－ＰＬＡ］水平为?１９．８７±８．１２ＩＵ／ｍＩ，健康对照??组的水平为１２．８９?＋?６．１５?ＫＪ／ｍｌ（Ｐ＜０．００１）。结果如图３所示。??３３??
【共引文献】

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本文编号：2838894