β1肾上腺素受体激活通过Notch通路促进心梗后巨噬细胞分泌NGF

发布时间：2020-11-02 05:09

　　 背景:急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)是最严重的冠心病之一,严重威胁人类的生存和健康。室性心律失常是引起心肌梗死患者早期死亡的主要原因,心肌梗死后交感神经重构在室性心律失常和猝死发生中起重要作用。心肌梗死发生后,梗死周边区心肌组织去甲肾上腺素浓度明显增加,而且与交感神经重构程度一致。这提示,心肌梗死后局部儿茶酚胺快速分泌,浓度维持在较高水平。相关研究显示,美托洛尔和卡维地洛能够改善心肌梗死后交感神经重构,降低室性心律失常易感性。这提示,儿茶酚胺水平增高可以促进心脏交感神经增生,但是其作用及机制有待进一步阐明。研究显示,梗死心肌局部神经生长因子(nerve growth factor,NGF)快速和持续表达上调,是心脏神经再生和交感神经重构的关键。而巨噬细胞是NGF的主要来源,在心肌梗死后交感神经重构过程中起着决定性作用。Flierl和Nguyen分别发表在《Nature》上的研究结果表明,巨噬细胞膜上存在肾上腺素受体,肾上腺素受体阻滞剂能抑制多种巨噬细胞源性炎症因子的产生。心肌梗死后交感神经重构过程中,NGF几乎伴随炎症因子表达增加。而儿茶酚胺能否促进巨噬细胞表达NGF并未明确。有研究做了大鼠的心梗模型,发现使用DAPT抑制Notch通路可以抑制M1型巨噬细胞释放NGF。这提示,notch通路参与了巨噬细胞释放NGF的过程,但其与儿茶酚胺的关系尚不明确。目的:因此,我们尝试探索肾上腺素对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞表达NGF的影响,并通过加入各肾上腺素受体阻滞剂,探索促进NGF表达的受体亚型。最后探讨其作用机制。方法:首先,评估肾上腺素对LPS激活巨噬细胞RAW264.7表达NGF的剂量和时间依赖效应。然后添加不同的肾上腺素能受体阻滞剂,探索促进NGF表达的受体亚型。明确作用的受体亚型后,探索肾上腺素和主要的受体阻滞剂对Notch 1/Jagged 1表达的影响,以明确肾上腺素受体亚型作用与Notch 1/Jagged1的上下游关系。最后使用γ—分泌酶抑制剂DAPT抑制Notch受体,再加入肾上腺素作用于巨噬细胞,观察NGF表达是否受DAPT的影响,从而明确Notch通路在肾上腺素影响巨噬细胞表达NGF中的作用。结果:肾上腺素预处理(0.01nmol/mL)2小时显著促进LPS诱导的巨噬细胞表达NGF,并且β1—受体阻断剂美托洛尔可明显抑制该过程。同时,肾上腺素预处理也促进了Notch 1/Jagged 1的表达,而美托洛尔可抑制这一过程。最后,加入DAPT抑制了肾上腺素促进NGF表达的作用。结论:在这项研究中,我们首次发现:1.低剂量肾上腺素预处理巨噬细胞可明显促进LPS介导的巨噬细胞表达NGF。2.β1肾上腺素受体是肾上腺素促进LPS介导的巨噬细胞表达NGF的主要受体亚型。3.Notch通路参与了肾上腺素促进NGF表达的过程。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R542.22
【部分图文】：

?ＥＬＩＳＡ检测ＮＧＦ浓度，结果显示在Ｏ．Ｏｌｎｍｏｌ／ｍＬ肾上腺素预处理组中ＮＧＦ的??浓度增加最明显（图２－１Ｃ）。因此，选择Ｏ．Ｏｌｎｍｏｌ／ｍＬ肾上腺素预处理巨噬细??胞２小时，再加入ＬＰＳ１０ｎｇ／ｍＬ可使巨噬细胞表达ＮＧＦ最为明显。??Ａ?Ｂ??８０－，?ＬＰＳ?１０ｎｇ／ｍＬ?命?ＰＢＳ?１００－，??＾?ｌ＿ｌ＿??〇?１０?２０?３０?４０?Ｂｌａｎｋ?０?１?２?４?６??ｔｒｅａｔｅｄ?ｔｉｍｅ（ｈ）?ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ（ｈ）??１５０ｎ??＊??＾?１００－?丁丁??！，?ｉｉｉ?Ｉ＊??］－１Ｍ?１１１?■??Ｅ（ｎｍｏｌ／ｍＬ）?０?０?０．００１?０．０１?０．１?１??ＬＰＳ（ｎｇ／ｍＬ）?〇?１０?１０?１０?１０?１０??图２－１肾上腺素对巨噬细胞ＬＰＳ诱导的ＮＧＦ表达的影响??Ａ．?ＮＧＦ浓度与ＬＰＳ或ＰＢＳ处理巨噬细胞时间的关系。＊＊＊?Ｐ?＜０．００１与ＰＢＳ组相比。??Ｂ．?Ｏ．Ｏｌｎｍｏｌ／ｍＬ肾上腺素预处理巨噬细胞不同时间对ＮＧＦ表达的影响，（Ｂｌａｎｋ组仅加入??ＬＰＳ，无肾上腺素）。＊Ｐ＜０．０５，与肾上腺素预处理０小时组相比。Ｃ．不同浓度肾上腺素??预处理巨噬细胞２小时对ＮＧＦ表达的影响。＊Ｐ＜０．０５

图SE小LPS阴.E+LPS

ｆ〇－?ｉＳ?ｉ｜?ｆｃ??１Ｊ?孕?ｂ＿?ｈ＿?ｈ釋??ＰＢＳ?ＬＰＳ?Ｅ＋ＬＰＳ?Ｍ＋Ｅ＋ＬＰＳ??图４－１?ｐｉ受体激动促进ＬＰＳ介导巨噬细胞表达Ｎｏｔｃｈ?１和Ｊａｇｇｅｄ?１??巨噬细胞分为四组．？?Ａ：空白组，Ｂ：脂多糖组，Ｃ：肾上腺素＋脂多糖组，Ｄ：美托洛??３８??
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本文编号：2866613