TfR-BiTE介导T细胞对血液恶性肿瘤靶向杀伤的研究

发布时间：2020-12-13 07:31

　　目的转铁蛋白受体（Transferrin Receptor,TfR,CD71）介导细胞对铁的吸收,对细胞增殖具有重要意义。生理情况下,TfR在细胞表面低表达,而肿瘤细胞铁代谢发生改变,对铁的摄入增加,故TfR表达水平大幅上调。本研究旨在构建并生产出靶向TfR的双特异性抗体,并通过体外细胞系实验与临床样本实验,验证其活化T细胞并靶向杀伤肿瘤细胞的作用,为TfR作为肿瘤治疗靶点奠定基础。方法1.构建表达载体Single-TfR-CD3-His并转染DG44细胞,挑选出蛋白表达量较高的细胞株大规模培养,用镍离子亲和层析法纯化出目的抗体并鉴定。2.体外细胞系实验流式检测TfR-BiTE介导T细胞对多种不同细胞来源的血液肿瘤细胞的杀伤情况。3.收集临床白血病患者血样,并检测肿瘤细胞TfR表达水平,流式检测TfR-BiTE介导T细胞对原代白血病细胞的杀伤效果。结果1.纯化出TfR-BiTE共约0.8ml,浓度为2.17mg/ml,抗体分子量约55kDa。2.血液肿瘤均高表达TfR,TfR-BiTE介导T细胞对血液各肿瘤细胞系均有不错的杀伤效果:对AML细胞系KG-1a最大杀伤率达到约40%,对淋巴... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TfR一Bi下〔分别与相应靶点结合

分析上图发现：TfR-BiTE 可以介导 PBMCs 对多种血液肿瘤细胞发挥杀伤作，杀伤效果与 TfR-BiTE 浓度成正比，浓度低至 1ng/ml 时即可观察到杀伤效果。 步分析发现，不同细胞来源的肿瘤细胞对 TfR-BiTE 介导的 PBMCs 杀伤效应敏感性不同，KG-1a 的最大死亡率为 40%左右，而两种淋巴细胞来源的肿瘤细死亡率较高，尤其是 B 细胞来源的 U266，达到 80%的杀伤率。急性髓细胞白血细胞似乎对TfR-BiTE介导的PBMCs杀伤肿瘤细胞效果有 定的抵抗，TfR-BiTE导的 PBMCs 对 K562 和 HL-60 两种急性髓细胞白血病细胞系的杀伤效果甚至还逊于对 KG-1a 的杀伤效果。同时，我们还发现，MIX 组的死亡率总是要高出 MED，说明 CD3mAb 对 T 细胞有 定的活化作用，而这部分活化的 T 细胞也有 定杀伤效果，但这种程度的活化和对肿瘤细胞的杀伤效果与 TfR-BiTE 相比显得不足道。TfR-BiTE 分别介导 PBMCs 和活化的 T 细胞杀伤肿瘤细胞系

分析结果发现：活化的 T 细胞对 MOLT-4 的杀伤效果提升显著，在效应细胞数量减半的情况下，在抗体浓度仅为 10ng/ml 时，就达到最大杀伤效果，且最大杀伤效果比 PBMCs 的效果有所提升，说明活化的 T 细胞的确比 na ve T 细胞具有更好的杀伤效果。从结果看，活化的 T 细胞对 U266 的杀伤效果与 PBMCs 无异，可能是因为效应细胞数量减半的原因，也可能是 U266 较敏感，PBMCs 中的 na veT 细胞就对其有明显的杀伤效果。四、TfR-BiTE 体外杀伤原代肿瘤细胞1.白血病细胞 TfR 表达水平检测流式细胞术检测白血病患者骨髓血中肿瘤细胞的 TfR 表达水平，结果见图 5和图 6。


本文编号：2914173