尼可地尔改善高糖抑制骨髓来源内皮祖细胞功能的机制研究

发布时间：2021-01-26 00:26

　　目的:高血糖加重了血管内皮功能障碍,导致糖尿病患者易患冠状动脉粥样硬化心脏病（coronary heart disease,CHD）,EPCs（Endothelial progenitor cells）可以直接参与受损内皮的修复并提高其功能。然而,在高糖环境下EPCs功能显著降低。因此,需要可以提高EPCs生物学功能的方法。尼可地尔是兼具类硝酸酯作用及三磷酸腺苷敏感性钾通道（K+ATP channel）开放功能。同时,尼可地尔也是一种心血管系统保护药物。但尼可地尔是否可以提高高糖环境下EPCs的功能以及潜在的机制未知。在该研究中,我们探究了高糖环境下尼可地尔对EPCs的作用机制。方法:首先使用密度梯度离心法分离出大鼠骨髓单个核细胞,结合差速贴壁法以及改良后新增的集落挑选法,在培养过程中不断纯化EPCs。通过吞噬试验,免疫荧光检测,流式细胞术鉴定,增殖实验,活力检测,迁移试验和体外成管实验多方面鉴定EPCs。然后探究大鼠EPCs在不同浓度葡萄糖条件下的增殖、迁移及血管形成情况,为后续高糖环境EPCs病理生理机制探究提供参考。最后在高糖环境下（25 mM）,用尼可地尔处理EPCs。分别使用... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１原代骨髓来源大鼠ＥＰＣｓ形态学观察??Ａ：骨髓单个核细胞；Ｂ：第一次更换细胞培养液后的贴壁的ＥＰＣｓ；?Ｃ：需要被??

３．２?ＥＰＣｓ吞噬功能鉴定??对经过集落挑选纯化后的原代ＥＰＣｓ进行吞噬功能检测，结果显示ＥＰＣｓ具??有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ的能力，使细胞在共聚焦显微镜下呈现红色（图２Ａ）。同时，??ＥＰＣｓ还具有结合ＦＩＴＣ－ＵＥＡ－Ｉ的功能使细胞呈现出绿色（图２Ｂ）。ＤＡＰＩ将细??胞核染成蓝色（图２Ｃ）。最终，大约９５．７±３．８％细胞同时具有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ和??结合ＦＩＴＣ－ＵＥＡ－Ｉ能力，呈现黄色（图２Ｄ）。??■??■??图２?ＥＰＣｓ吞噬功能检测??Ａ：?ＥＰＣｓ具有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ使细胞呈现红色；Ｂ：?ＥＰＣｓ具有结合ＦＩＴＣ－Ｕ的功能使细胞呈现出绿色；Ｃ：?ＥＰＣｓ细胞核被ＤＡＰＩ染成蓝色；Ｄ：?ＥＰＣｓ具有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ和结合ＦＩＴＣ－ＵＥＡ－Ｉ能力，呈现黄色。??１８??

图３?ＥＰＣｓ免疫荧光检测??Ａ：?ＥＰＣｓ?表达?ｖＷＦ；?Ｂ：?ＥＰＣｓ?表达?ＶＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ


本文编号：3000154