髓系恶性肿瘤部分岩藻糖基转移酶基因表达研究

发布时间：2021-05-06 10:45

　　目的研究髓系恶性肿瘤部分岩藻糖基转移酶基因的表达情况，基因包括斑马鱼岩藻糖基转移酶基因（DF1、DF2、DF7、DF8、DF9、DF10、DF11）和参与人类ABH血型抗原和Lewis血型抗原形成的岩藻糖基转移酶基因（FUT1、FUT2、FUT3、FUT6、FUT7）。方法应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（real-time fluorscence quantitativereverse transcription-polymerase chain reaction，FQ RT-PCR）检测具髓系表型的MYCN转基因型斑马鱼系岩藻糖基转移酶基因、HL-60人原髓细胞白血病细胞和急性髓细胞白血病（AML）/骨髓增生异常综合征（MDS）患者FUT1/2/3/6/7基因的表达，同时分别以野生型（WT）斑马鱼系、正常CD34（+）细胞和健康体检者作为各自的正常对照进行相应表达分析研究。结果斑马鱼岩藻糖基转移酶7、8、9、10、11基因在MYCN转基因型斑马鱼系和野生型斑马鱼系的相对表达情况分别为：4.858±0.203vs1.005±0.010、0.143±0.022vs1.040±0.1... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
前言
材料与方法
    1. 主要试剂
    2. 主要设备
    3. 研究对象
        3.1 野生型斑马鱼和 MYCN 转基因斑马鱼
        3.2 HL-60 细胞与正常 CD34（+）细胞
        3.3 AML/MDS 患者及其正常对照样本
    4. 细胞培养、计数、冻存和复苏方法
        4.1 细胞培养
        4.2 细胞计数
            4.2.1 原理
            4.2.2 细胞计数方法
        4.3 细胞冻存和复苏
            4.3.1 原理
            4.3.2 细胞冻存操作步骤
            4.3.3 细胞复苏操作步骤
    5. 临床样本的收集
    6. 分离外周血单个核细胞
        6.1 原理
        6.2 操作步骤
    7. 总 RNA 的提取、鉴定
        7.1 实验原理
        7.2 样本预处理
        7.3 操作步骤
        7.4 总 RNA 的鉴定
    8. cDNA 的制备
        8.1 去除基因组 DNA
        8.2 反转录反应
    9. 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（FQ RT-PCR）
        9.1 原理
        9.2 引物设计与合成
        9.3 反应体系和反应条件
        9.4 标准曲线的制备及线性范围的确定
        9.5 PCR 产物的确定和溶解曲线的分析
    10. 数据处理与统计学分析
结果
    1. 总 RNA 浓度和纯度的鉴定
    2. RT-PCR 产物的鉴定
        2.1 熔解曲线和扩增曲线分析
        2.2 电泳结果分析
    3. 各基因标准曲线
    4. 岩藻糖基转移酶基因的表达
        4.1 斑马鱼岩藻糖基转移酶各基因的表达
        4.2 HL-60 细胞部分岩藻糖基转移酶基因的表达
        4.3 AML/MDS 患者部分岩藻糖基转移酶基因的表达
讨论
    1. 岩藻糖基转移酶生物学特性
    2. 岩藻糖基转移酶基因实时荧光定量检测方法的优势和优化
        2.1 FQ RT-PCR 检测方法的优势
        2.2 FQ RT-PCR 检测方法的优化
    3. 血液系统恶性肿瘤模式生物斑马鱼与岩藻糖基转移酶
    4. HL-60 人原髓细胞白血病细胞与岩藻糖基转移酶
    5. 人类恶性肿瘤与岩藻糖基转移酶
    6. 总结
本实验的创新点与不足
结论
参考文献
附录
致谢
学术论文和科研成果目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]Rheb过表达在白血病细胞株HL-60和K562中的作用[J]. 徐乔竹,汪晓敏,王放放,高亚男,张英驰,鞠振宇,程涛,袁卫平,刘汉芝.  中国实验血液学杂志. 2013(02)
[2]α1,3岩藻糖基转移酶Ⅶ和糖蛋白CD24与肿瘤转移的研究进展[J]. 李文桦,张文.  中国癌症杂志. 2008(10)
[3]Gastrointestinal tract distribution of Salmonella enteritidis in orally in fected mice with a species-specific fluorescent quantitative polymerase chain reaction[J]. Shu-Xuan Deng, An-Chun Cheng, Ming-Shu Wang, Ping Cao Research Center of Poultry Diseases, College of Animal Science and Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, Sichuan Province, China Research Center of Poultry Diseases, College of Animal Science and Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University; Key Laboratory of Animal Diseases and Human Health of Sichuan Province, Yaan 625014, Sichuan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2007(48)
[4]Hsp90抑制剂新生霉素诱导HL-60细胞凋亡及其机制[J]. 吴丽贤,许建华,张昆仲,温彩霞,黄秀旺.  中国药理学通报. 2007(11)
[5]大黄素可能通过抑制Akt信号通路诱导HL-60细胞凋亡[J]. 郑合勇,胡建达,郑志宏,黄绿叶,陈英玉,郑静,陈鑫基,吕联煌.  药学学报. 2007(11)
[6]Validation of Zebrafish （Danio rerio） Reference Genes for Quantitative Real-time RT-PCR Normalization[J]. Andrew DODD,Daniel LA,Warren C. MCNABB,Donald R. LOVE.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2007(05)
[7]c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用[J]. 黄绿叶,胡建达,陈鑫基,祝亮方,胡辉亮.  中华血液学杂志. 2005(06)
[8]定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血中CK19mRNA表达的意义[J]. 姜铁军,李旭芬,蒋文智,曹江,郑树.  中国肿瘤临床. 2004(20)



本文编号：3171786