二甲基甲酰胺对心肌细胞炎性损伤的实验研究

发布时间：2017-04-20 17:09

  本文关键词：二甲基甲酰胺对心肌细胞炎性损伤的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨二甲基甲酰胺(DMF)是否对H9c2心肌细胞造成炎性损伤,同时探寻是否由于NF-κB信号通路的激活引发的炎症反应。方法不同浓度梯度(0m M,50m M,100m M,200m M)DMF染毒心肌细胞12h和200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,6h,8h,12h),用LDH、CK、CK-MB试剂盒分别检测细胞培养上清液中的LDH、CK、CK-MB,用TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 Elisa试剂盒检测不同浓度(0m M,50m M,100m M,200m M)DMF作用心肌细胞后炎症因子释放量以及200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)心肌细胞细胞培养上清液中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平;采用活性氧(ROS)试剂盒检测200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)心肌细胞内活性氧的水平;用western blotting(WB)检测200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)心肌细胞后,细胞核和细胞胞浆内p65的表达量,总蛋白中p-ikb的水平;采用免疫荧光细胞化学法(IFC)对200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)后,细胞核和胞浆内p65的情况。结果不同剂量DMF(0 m M,50 m M,100 m M,200 m M)染毒12h后细胞培养上清液中心肌细胞损伤指标LDH、CK、CK-MB水平均有升高,组间差异有统计学意义(LDH:F=564.426,P0.0001;CK:F=938.695,P0.0001;CK-MB:F=15.636,P=0.001);LDH、CK和CK-MB的水平在50m M,100m M,200m M染毒组较对照组高,差异均具有统计学意义(P0.01)。心肌细胞炎症指标TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的水平也均有升高(TNF-α:F=19.810,P0.001;IL-1β:F=50.638,P0.001;IL-6:F=13.265,P0.01;IL-8:F=11.521,P0.001);50m M和100m M较对照组TNF水平有所升高,但是差异无统计学意义;200m M染毒组较对照组以及其他染毒组TNF水平都有明显增加,均具有显著统计学差异(P0.001);IL-1β水平在50m M,100m M,200m M染毒组较对照组高,差异均具有统计学意义(P0.01);50m M染毒组较对照组IL-6水平有轻微升高,但是组间差异无统计学意义(P0.05)。100m M和200m M染毒组较对照组,IL-6水平均有增加(P0.05);各染毒组较对照组,IL-8均有升高,差异有统计学意义(P0.001)。200 m M DMF染毒不同时间后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)细胞培养上清液中LDH、CK、CK-MB水平升高,组间差异均有统计学意义(LDH:F=1618.106,P0.0001;CK:F=609.899,P0.001;CK-MB:F=119.176,P0.001)。TNF-α、IL-1β、IL-6水平在染毒后4h较其他各组高,差异均有统计学意义(皆P0.05),IL-8水平在染毒后2h较其他各组高,差异有统计学意义(P0.05)。200m M DMF染毒不同时间后,心肌细胞ROS的水平总体组间存在差异,差异具有显著统计学意义(F=54.722,P0.001)。2h染毒组活性氧水平最高,与对照组、其他染毒组相比,均有统计学差异(P0.05)。细胞核内p65水平:2h,4h和6h染毒组较对照组以及8h,12h染毒组显著升高,且差异具有统计学意义(P0.01);细胞浆内2h染毒组p65水平较对照组有显著降低,差异有统计学意义(P0.05).2h组与其他染毒组p65水平也有所降低,除了与12h染毒组有差异(P0.01),与4h,6h,8h染毒组比较均无统计学意义。总蛋白中的磷酸化IκB,2h、4h、6h染毒组均高于对照组以及其他染毒组(P0.05)。免疫荧光细胞化学检测发现DMF染毒后2h时细胞核内荧光较强,p65转核明显,其他染毒组核内荧光较弱。结论DMF染毒后,心肌细胞LDH、CK、CK-MB水平升高;炎性因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8)释放,活性氧升高,p65转核,证实发生炎性损伤,并且实验结果提示NF-κB信号通路参与了二甲基甲酰胺所致H9c2心肌细胞炎性损伤过程。
【关键词】：二甲基甲酰胺 心肌细胞 炎症 NF-κB信号通路
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R542.2
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1.前言12-14
• 2.材料和方法14-25
• 3.结果25-39
• 4.讨论39-42
• 5.结论42
• 6.参考文献42-48
• 附录48-49
• 致谢49-50
• 综述50-60
• 参考文献55-60

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本文编号：319125