白细胞介素18（IL-18）调控血管平滑肌细胞（VSMC）TNF-α、IL-6、IL-8的表达
发布时间：2021-11-25 01:32
背景和目的:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种慢性炎症反应,会增加患心血管疾病的风险,而心血管疾病是全球范围内死亡的主要原因。其病理学特征主要是内皮功能障碍以及在血管内膜上逐渐积累脂质、坏死细胞碎片和细胞外基质蛋白,最终导致血管闭塞或血栓形成并发症。目前在动脉粥样硬化病变中已经发现许多免疫细胞浸润,在对抗原性物质的局部炎症或免疫应答中这些免疫细胞被激活。并且在动脉粥样硬化血管的局部组织和周围系统中发现包括肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF-α）,白细胞介素1a（IL-1a）,白细胞介素1b（IL-1b）,白细胞介素4（IL-4）、干扰素-c（IFN-c）和白细胞介素18（IL-18）等炎症细胞因子。其中动脉粥样硬化斑块中IL-18的表达水平较高,IL-18通过与靶细胞膜上特异性受体结合激活相应的信号途径而发挥作用,并且IL-18结合蛋白（Interleukin 18 binding protein,IL-18BP）能够降低动脉粥样硬化斑块形成风险,提示IL-18在动脉硬化发病中可能发挥重要作用。IL-18处理血管平滑肌细胞（vasc...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度IL-18对VSMC细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表达水平的影响（*p<0.05）；b不同时间IL-18（30ng/ml）对VSMC细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表达水
安徽医科大学硕士学位论文30经过ELISA检测分析IL-18对VSMC细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白水平表达的影响。图2结果分析发现，IL-18（30ng/ml）能够显著增加VSMC上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白质水平的表达，且与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，FTNF-α=74.008，FIL-6=274.065，FIL-8=168.253，n=3）。图2IL-18处理后VSMC中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白水平表达的影响（n=3,*p<0.05）Figure2EffectofTNF-α,IL-6,andIL-8proteinexpressioninVSMCsafterIL-18treatment（n=3,*p<0.05）3.3Westernblot分析IL-18对VSMC细胞信号通路的影响为了进一步探讨IL-18对VSMC细胞IL-6、IL-8、TNF-α调控的可能机制，我们分析了IL-18对细胞中p38MAPK及PI3K/AKT信号通路的影响。Westernblot的结果分析显示，IL-18（30ng/ml）单独处理0、10、30、60、120min后分别pp38MAPK在60min、pAKT在120min蛋白质表达水平达到峰值，与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，n=3）；而对AKT的表达没有显著影响（n=3，见图3）。3.2ELISA法分析蛋白水平表达
安徽医科大学硕士学位论文31图3IL-18对VSMC细胞中p38MAPK及PI3K/AKT信号通路的影响Figure3EffectofIL-18onp38MAPKandPI3K/AKTsignalingpathwayinVSMCcells3.4IL-18刺激VSMC后TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白的表达水平与p38MAPK及PI3K/AKT信号通路相关性的研究为了进一步探讨IL-18增加TNF-α、IL-6、IL-8的表达是否与p38MAPK及PI3K/AKT信号途径激活激活相关，特异性抑制剂SB203580(10μM，p38MAPK抑制剂)及LY294002(50μM,PI3K/AKT抑制剂)处理VSMC细胞并分析其对IL-18诱导细胞因子表达的影响。图4a,b结果显示，SB203580及LY294002分别特异性部分阻断IL-18激活的p38MAPK及PI3K/AKT信号途径。如图5ELISA实验分析显示，特异性抑制剂SB203580(10μM，p38MAPK抑制剂)能部分阻断IL-18诱导的TNF-α、IL-6、IL-8表达，与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，n=3）；特异性抑制剂LY294002(50μM,PI3K/AKT抑制剂)能部分阻断IL-18诱导的TNF-α、IL-6、IL-8表达，与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，n=3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平[J]. 金国玺,张燕,毕娅欣,于磊. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(09)
本文编号：3517153
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同浓度IL-18对VSMC细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表达水平的影响（*p<0.05）；b不同时间IL-18（30ng/ml）对VSMC细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表达水
安徽医科大学硕士学位论文30经过ELISA检测分析IL-18对VSMC细胞中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白水平表达的影响。图2结果分析发现，IL-18（30ng/ml）能够显著增加VSMC上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白质水平的表达，且与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，FTNF-α=74.008，FIL-6=274.065，FIL-8=168.253，n=3）。图2IL-18处理后VSMC中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白水平表达的影响（n=3,*p<0.05）Figure2EffectofTNF-α,IL-6,andIL-8proteinexpressioninVSMCsafterIL-18treatment（n=3,*p<0.05）3.3Westernblot分析IL-18对VSMC细胞信号通路的影响为了进一步探讨IL-18对VSMC细胞IL-6、IL-8、TNF-α调控的可能机制，我们分析了IL-18对细胞中p38MAPK及PI3K/AKT信号通路的影响。Westernblot的结果分析显示，IL-18（30ng/ml）单独处理0、10、30、60、120min后分别pp38MAPK在60min、pAKT在120min蛋白质表达水平达到峰值，与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，n=3）；而对AKT的表达没有显著影响（n=3，见图3）。3.2ELISA法分析蛋白水平表达
安徽医科大学硕士学位论文31图3IL-18对VSMC细胞中p38MAPK及PI3K/AKT信号通路的影响Figure3EffectofIL-18onp38MAPKandPI3K/AKTsignalingpathwayinVSMCcells3.4IL-18刺激VSMC后TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白的表达水平与p38MAPK及PI3K/AKT信号通路相关性的研究为了进一步探讨IL-18增加TNF-α、IL-6、IL-8的表达是否与p38MAPK及PI3K/AKT信号途径激活激活相关，特异性抑制剂SB203580(10μM，p38MAPK抑制剂)及LY294002(50μM,PI3K/AKT抑制剂)处理VSMC细胞并分析其对IL-18诱导细胞因子表达的影响。图4a,b结果显示，SB203580及LY294002分别特异性部分阻断IL-18激活的p38MAPK及PI3K/AKT信号途径。如图5ELISA实验分析显示，特异性抑制剂SB203580(10μM，p38MAPK抑制剂)能部分阻断IL-18诱导的TNF-α、IL-6、IL-8表达，与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，n=3）；特异性抑制剂LY294002(50μM,PI3K/AKT抑制剂)能部分阻断IL-18诱导的TNF-α、IL-6、IL-8表达，与空白对照组比较具有统计学意义（p＜0.05，n=3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪细胞及RAW264.7巨噬细胞IL-18Rβ的水平[J]. 金国玺,张燕,毕娅欣,于磊. 细胞与分子免疫学杂志. 2015(09)
本文编号：3517153
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