HSP22对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤及相关的保护机制研究

发布时间：2017-07-13 10:27

  本文关键词：HSP22对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤及相关的保护机制研究

  更多相关文章： HSP22 HUVECs ox-LDL PPARγ eNOS

【摘要】：目的:观察HSP22与PPARγ激动剂在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能和单核细胞的粘附中的影响,并研究其可能机制。方法:(1)用不同浓度的ox-LDL处理HUVECs 24h,用免疫印记技术(Western blot)分别检测HUVECs e NOS、ICAM1、HSP22、PPARγ蛋白表达情况,观察剂量效应。(2)用HSP22shRNA干扰组、HSP22质粒过表达组、HSP22空载组转染HUVECs 48h,再加入80ug/mL ox-LDL处理24h,检测指标同前(1),同时用荧光显微镜和酶标仪检测单核细胞的粘附情况。(3)PBS空白组、不同浓度(0μM/L,1μM/L,10μM/L,30μM/L)PPARγ激动剂比格列酮预处理HUVECs12h,再加入80ug/mL ox-LDL处理24h,Western blot检测HSP22蛋白,了解HSP22与PPARγ的可能关系。(4)用HSP22质粒过表达转染两组HUVECs 48h,分别用PPARγ抑制剂T0070907 10nM/L、PBS预处理12h,再加入80ug/m L ox-LDL处理24h,用Western blot分别检测HUVECs eNOS、ICAM1蛋白表达情况,用荧光显微镜和酶标仪检测单核细胞的粘附情况。结果:1、ox-LDL合适的干预浓度:随着ox-LDL处理浓度的增加,eNOS蛋白表达显著下降(P0.05)、HSP22、PPARγ蛋白表达升高(P0.05)、ICAM1表达明显升高(P0.05)。2、HSP22蛋白对内皮功能及单核细胞粘附的影响:在相同干预条件下,HSP22蛋白过表达组ICAM1蛋白明显低于空载组与HSP22shRNA组(P0.05),eNOS蛋白明显高于其他两组(P0.05),对单核细胞的粘附明显低于其他两组(P0.05),各组PPARγ蛋白及mRNA无明显变化。3、HUVEC中HSP22与PPARγ的关系:随着PPARγ激动剂比格列酮处理浓度的增加,ICAM1表达下降(P0.05),eNOS表达升高(P0.05),HSP22表达下降(P0.05)。4、HSP22对ox-LDL处理的HUVEC的内皮功能及对单核细胞粘附影响的可能机制:在相同干预条件下,HSP22过表达+PPARγ抑制剂组的炎症因子ICAM1蛋白较HSP22过表达组增加,对单核细胞的粘附增加,无统计学意义(P0.05)。eNOS蛋白无明显变化。结论:1、ox-LDL损伤HUVECs并可诱导HSP22、PPARγ、ICAM1表达增加,降低eNOS表达。2、HSP22可抑制在ox-LDL诱导环境下HUVEC炎症因子ICAM1产生和对单核细胞的粘附并促进eNOS表达,改善内皮功能,对PPARγ表达未见明显影响。3、PPARγ激动剂比格列酮可抑制ox-LDL诱导环境下HUVEC炎症因子ICAM1产生并促进eNOS表达,对HSP22的表达未见明显影响。4、HSP22对ox-LDL诱导的内皮细胞功能损伤的所起的保护作用可能与PPARγ的抗炎通路关系不大。
【关键词】：HSP22 HUVECs ox-LDL PPARγ eNOS
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料与方法14-27
• 2.1 主要实验材料和试剂14-16
• 2.1.1 实验细胞株14
• 2.1.2 主要仪器设备14-15
• 2.1.3 主要试剂15-16
• 2.1.4 试剂配制16
• 2.2 实验方法16-26
• 2.2.1 培养人脐静脉内皮细胞与人外周血单核细胞系16-17
• 2.2.2 ox-LDL及PPARγ 抑制剂、激动剂分别与HUVECs孵育17
• 2.2.3 质粒DNA提取17-19
• 2.2.4 DNA的产量与质量检测：19
• 2.2.5 转染19
• 2.2.6 分组培养19
• 2.2.7 Western blot操作步骤19-23
• 2.2.8 荧光定量RT-PCR检测mRNA表达23-25
• 2.2.9 单核细胞粘附实验25-26
• 2.3 数据处理26-27
• 第3章 结果27-37
• 3.1 不同浓度ox-LDL对HUVEC中ICAM1、eNOS、HSP22及PPARγ 蛋白表达的影响27-28
• 3.2 HSP22对内皮功能与其激活及对单核细胞的粘附的影响28-33
• 3.2.1 HSP22质粒转染后的效率及HSP22表达28-30
• 3.2.2 HSP22对HUVEC中PPARγmRNA的影响30-31
• 3.2.3 HSP22对ox-LDL诱导的内皮功能及其激活的影响31-32
• 3.2.4 HSP22的表达对ox-LDL诱导内皮对单核细胞粘附的影响32-33
• 3.3 PPARγ 激动剂比格列酮对HSP22表达的影响33-34
• 3.4 HSP22蛋白对ox-LDL处理的HUVEC细胞内皮功能与激活及其对单核细胞粘附影响的可能机制34-37
• 3.4.1 HSP22蛋白对ox-LDL处理的HUVEC细胞ICAM1和eNOS表达影响的机制34-36
• 3.4.2 HSP22的表达对ox-LDL诱导的HUVEC对THP1细胞粘附的影响36-37
• 第4章 讨论37-41
• 4.1 HSP22在ox-LDL诱导环境下的表达37-38
• 4.2 HSP22与ICAM1、eNOS38-39
• 4.3 PPARγ 与ICAM1、eNOS39-40
• 4.4 HSP22与PPARγ40-41
• 第5章 结论与展望41-42
• 5.1 结论41
• 5.2 不足之处41-42
• 致谢42-43
• 参考文献43-47
• 综述 Sirt1与动脉粥样硬化的研究进展47-56
• 参考文献54-56

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