二甲基亚砜对P19细胞向心肌细胞分化的影响及分化后NADPH氧化酶表达的变化

发布时间：2017-10-02 13:25

  本文关键词：二甲基亚砜对P19细胞向心肌细胞分化的影响及分化后NADPH氧化酶表达的变化

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【摘要】：目的①体外探讨不同浓度的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对诱导P19细胞向心肌细胞分化的影响;②研究P19细胞体外向心肌细胞分化后细胞内NADPH氧化酶水平的改变。方法①原代生长的P19细胞予以α-MEM完全培养液(含90%α-MEM、10%FBS、青霉素100u/ml、链霉素100ug/ml)培养。选取合适的该细胞株,予以适当浓度的胰酶处理后,以约1×106个/ml的细胞密度转移到10 cm大小的悬浮生长培养皿,加入不同浓度诱导培养液10 ml(分别含0.4%,0.9%及1.4%DMSO的完全培养液),悬浮培养。第3天以7 ml的上述诱导培养液进行不完全换液。第4天待培养皿内有大量细胞聚集体形成时,取6 cm大小组织培养皿,吸取适量该细胞聚集体转入其中使其贴壁生长,后以完全培养液每两天换液一次,培养至13天,在显微镜下观察不同生长时期的细胞形态。收集各组不同诱导时间的细胞,行Western Blot检测细胞内肌钙蛋白I(c Tn I)的表达情况,以确定其向心肌细胞的分化;对各组相同分化时间的P19细胞行Western Blot比较c Tn I蛋白的表达,以比较分化的程度;②行Western Blot检测P19细胞向心肌细胞分化前后细胞内NADPH氧化酶的两个亚基p22-phox以及gp91-phox水平的变化;③应用SPSS 11.0软件进行统计分析,c Tn I蛋白水平及分化前后细胞内p22-phox及gp91-phox蛋白水平的比较采用t检验,Western blot结果目的条带应用软件Image J进行灰度值计算,检验水准取P=0.05。结果①P19细胞经0.4%DMSO诱导分化,于第9天开始检测到cTnI表达阳性,第11天c Tn I表达高于第9天,同时第13天也高于第11天;经0.9%DMSO诱导分化,于第7天开始检测到c Tn I表达阳性,第9天c Tn I表达高于第7天,同时第11天高于第9天,第13天也高于第11天,上述差异均具统计意义(P0.05);1.4%DMSO处理的P19细胞于诱导第三天大量凋亡,未能诱导成功。②分别经0.4%DMSO和0.9%DMSO诱导的P19细胞,分化相同时间后者较前者c Tn I表达高,差异具统计意义(P0.05)。③P19细胞向心肌细胞分化后细胞内p22-phox及gp91-phox蛋白水平较分化前高,差异具统计意义(P0.05)。结论DMSO在一定条件下可诱导P19细胞在体外向心肌细胞分化;DMSO的诱导作用在一定范围内与其浓度成正相关,然而浓度过高可以导致细胞凋亡;P19细胞向心肌细胞分化后NADPH氧化酶亚基p22-phox及gp91-phox表达上调,提示NADPH氧化酶水平增高,氧化应激水平增加。
【关键词】：P19细胞 NADPH 氧化酶 氧化应激 心肌病 心肌细胞
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 第一部分DMSO对体外诱导P19细胞向心肌细胞分化的影响10-30
• 1.引言10-11
• 2.材料与方法11-21
• 3.结果21-27
• 4.讨论27-28
• 5.结论28
• 6.参考文献28-30
• 第二部分 体外诱导P19细胞向心肌细胞分化后p22-phox及gp91-phox表达的变化30-47
• 1.引言30-33
• 2.材料与方法33-39
• 3.结果39-41
• 4.讨论41-43
• 5.结论43
• 6.参考文献43-47
• 附录47-49
• 致谢49-50
• 综述50-60
• 参考文献57-60

【参考文献】

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本文编号：959865