卵泡抑素样蛋白1抵抗过量一氧化氮诱导的心肌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2017-10-04 00:28

  本文关键词：卵泡抑素样蛋白1抵抗过量一氧化氮诱导的心肌细胞凋亡的机制研究

  更多相关文章： FSTL1 SNP Akt信号通路 Smad1/5/8信号通路

【摘要】：目的:已证实心功能不全与心肌细胞的凋亡密不可分,心肌细胞的凋亡又与过量一氧化氮(NO)蓄积有着很大的关系,硝普钠(SNP)作为临床上广泛运用的血管扩张剂,同时它也是广泛运用的NO供体,对心肌细胞有损伤作用。因此本实验旨在研究卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)对SNP诱导的心肌细胞凋亡的保护作用。方法:选用大鼠成肌细胞系(H9C2)细胞培养传代进行体外实验。(1)通过SNP(2mM)刺激H9C2细胞24h建立SNP诱导的H9C2细胞凋亡模型;(2)通过q-PCR和Western Blot检测SNP刺激H9C2前后FSTL1的表达是否有差异;(3)通过引入外源性的FSTL1(100ng/ml)预处理H9C2细胞30min比较SNP刺激后H9C2细胞凋亡是否减少;(4)通过转染siFSTL1比较SNP刺激后H9C2细胞凋亡是否增加;(5)用总一氧化氮检测试剂盒采用硝酸酶还原法将硝酸盐还原为亚硝酸盐,然后通过检测亚硝酸盐的含量,间接计算出总一氧化氮;(6)通过引入PI3K/Akt、Smad2/3抑制剂LY294002和SB5253334和Smad1/5/8信号通路激动剂BMP-4研究FSTL1保护H9C2的分子机制。结果:利用DAPI染色结果可以显示H9C2细胞在SNP(2mM)刺激24h后与没有经过SNP刺激的H9C2细胞比较,H9C2细胞的凋亡数量显著增加。以FSTL1(100ng/ml)预处理30min再以SNP刺激后H9C2细胞的凋亡显著降低。通过转染沉默掉内源性的FSTL1后再以SNP刺激H9C2细胞,其凋亡数量比未沉默内源性的FSTL1的凋亡数量显著增加。q-PCR检测结果显示SNP刺激H9C2后其表达的FSTL1在基因水平减少,Western Blot检测结果显示SNP刺激H9C2后其表达的FSTL1在蛋白水平减少。总一氧化氮检测试剂盒检测结果显示在SNP刺激后培养基中NO的含量比对照组明显增加,但是以FSTL1预处理30min后再以SNP刺激NO的含量比没有FSTL1预处理组显著降低。通过引入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002干扰Akt信号通路后发现FSTL1保护H9C2细胞的作用明显减弱,引入BMP4激动Smad1/5/8信号通路发现FSTL1保护H9C2细作用明显减弱,而引入SB523334抑制Smad2/3信号通路后FSTL1保护H9C2细胞的作用前后无明显变化。结论:FSTL1对SNP诱导的H9C2心肌细胞凋亡具有保护作用;FSTL1保护心肌细胞凋亡的作用至少是通过激活Akt信号通路和抑制Smad1/5/8信号通路实现的。
【关键词】：FSTL1 SNP Akt信号通路 Smad1/5/8信号通路
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-20
• 一、材料11-12
• 二、实验方法12-20
• 结果20-32
• 一、H9C2心肌细胞的培养及镜下的形态观察20
• 二、SNP诱导的H9C2凋亡模型的建立20-21
• 三、SNP刺激后FSTL1的表达变化21-23
• 四、FSTL1对SNP诱导的H9C2细胞凋亡具有保护作用23-24
• 五、沉默内源性FSTL1后SNP诱导的H9C2细胞凋亡数量增加24-26
• 六、NO浓度检测26-27
• 七、LY294002抑制PI3K/AKT信号通路抑制FSTL1保护心肌细胞27-28
• 八、BMP-4 激动SMAD1/5/8 信号通路抑制FSTL1保护心肌细胞28-30
• 九、SB525334抑制SMAD2/3 信号通路FSTL1保护作用无明显变化30-32
• 讨论32-37
• 结论37-38
• 参考文献38-42
• 综述42-50
• 参考文献47-50
• 中英文缩略词对照50-51
• 攻读硕士期间公开发表的论文51-52
• 致谢52-54

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本文编号：967622