黄芪甲苷联合5-氮胞苷诱导hUCB-MSCs分化为心肌样细胞并抑制其凋亡

发布时间：2017-10-05 21:28

  本文关键词：黄芪甲苷联合5-氮胞苷诱导hUCB-MSCs分化为心肌样细胞并抑制其凋亡

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【摘要】：目的:5-氮胞苷(5-aza)是一种间充质干细胞(MSCs)分化的有效诱导剂,但存在较大的毒副作用。黄芪甲苷(AST)为黄芪制剂中的主要活性成分,也能诱导MSCs分化。本研究的目的旨在阐明AST联合5-aza对人脐血间充质干细胞(h UCB-MSCs)分化为心肌样细胞的影响,并探讨其对心肌细胞凋亡的保护作用。方法:1.采用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离和培养h UCB-MSCs,流式细胞术鉴定h UCB-MSCs免疫表型抗原CD34、CD44和CD29。2.取第3代h UCB-MSCs,分别予培养基(空白对照组)、5μmol/L 5-aza(低剂量5-aza组)、10μmol/L 5-aza(高剂量5-aza组)及200 mg/L AST+5μmol/L 5-aza(AST+5-aza组)处理4周,显微镜下观察细胞形态学改变;采用免疫细胞化学染色法检测心肌肌钙蛋白T(c Tn T)、Desmin表达;通过荧光实时定量PCR、western blot分别检测心房利钠肽(ANP)m RNA、蛋白表达;行酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞内环磷酸腺苷(c AMP)含量。3.在h UC-MSCs诱导分化4周后,予高糖(33 mmol/L)/葡萄糖氧化酶(2m U/m L)处理12 h以诱导心肌样细胞凋亡,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:1.h UCB-MSCs表面抗原CD34阴性,CD44、CD29阳性。2.诱导后细胞形态发生显著变化;空白对照组未见c Tn T、Desmin表达,高剂量5-aza组、AST+5-aza组c Tn T、Desmin表达水平较低剂量5-aza组升高(P0.01),但AST+5-aza组与高剂量5-aza组之间无区别(P0.05);高剂量5-aza组、AST+5-aza组ANP表达水平、细胞内c AMP含量显著高于低剂量5-aza组(P0.01),但AST+5-aza组上述指标与高剂量5-aza组相比,差异无显著性(P0.05),而且各药物诱导组ANP表达水平、细胞内c AMP含量均高于空白对照组(P0.01)。3.与空白对照组比较,低、高剂量5-aza组Bcl-2蛋白表达水平降低(P0.05或0.01),细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平升高(P0.05或0.01),AST+5-aza组Bcl-2蛋白表达水平增加(P0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平减少(P0.05)。结论:1.h UCB-MSCs在体外能被AST联合5-aza诱导分化为心肌样细胞,其效果与10μmol/L 5-aza相当。2.AST联合5-aza通过增加Bcl-2/Bax比值抑制心肌样细胞凋亡。
【关键词】：黄芪甲苷 5-氮胞苷 人脐血间充质干细胞 心肌样细胞 凋亡
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R54
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 主要缩略英文索引10-11
• 引言11-13
• 材料与方法13-18
• 结果18-30
• 讨论30-34
• 结论34-36
• 参考文献36-40
• 综述40-52
• 参考文献48-52
• 在攻读硕士学位期间发表论文52-54
• 致谢54

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