转录因子E2-2调控自噬影响内皮祖细胞增殖的研究

发布时间：2017-10-06 10:11

  本文关键词：转录因子E2-2调控自噬影响内皮祖细胞增殖的研究

  更多相关文章： E2-2 自噬 内皮祖细胞 增殖

【摘要】：研究背景:内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)作为内皮细胞(Endothelial cells,ECs)主要来源,在受损血管内皮的修复中发挥重要作用。近年有研究表明,转录因子E2-2可抑制EPCs的增殖。E2-2是一种“螺旋-环-螺旋”转录调控因子,属于E蛋白家族,在真核细胞内广泛表达。但E2-2对EPCs增殖能力的影响,以及调控EPCs增殖的内在机制还不十分清楚。自噬作为细胞的基本生命活动,对维持细胞生理稳定有重要作用。有研究显示,E2-2能够通过Wnt/β-catenin通路抑制肿瘤细胞自噬,调控肿瘤细胞增殖。E2-2能否通过调控自噬水平从而实现对EPCs增殖的调控是本研究涉及的切入点。本研究通过实验观察E2-2对EPCs增殖的影响,以及明确该影响是否通过调控自噬水平实现的,从而为受损血管内皮修复和冠心病治疗新策略提供新的理论依据。研究目的:明确E2-2通过调控自噬影响EPCs增殖,并初步探讨其中机制。研究方法:小鼠脾源性EPCs的分离、培养、鉴定。过表达和干扰E2-2后,检测EPCs的增殖与自噬水平。自噬抑制剂氯喹(Chloroquine,CQ)不同浓度不同时间处理EPCs。干扰E2-2后加入CQ与只干扰E2-2不加CQ组对比EPCs增殖与自噬水平。干扰E2-2后,检测EPCs内ATG7表达水平。共同转染干扰E2-2和ATG7后,检测自噬标志蛋白的变化情况。CCK-8试验用于检测EPCs增殖情况,转染Ad-m RFP-GFP-LC3后,共聚焦显微镜下观察EPCs内自噬小体和自噬溶酶体。Western blotting实验检测蛋白表达情况,PCR、Q-PCR检测m RNA表达。研究结果:1.过表达E2-2能够抑制EPCs增殖能力,下调EPCs自噬水平;2.干扰E2-2能够增加EPCs增殖能力,上调自噬水平;3.加入CQ能够阻断干扰E2-2引起的EPCs自噬和增殖上调;4.干扰E2-2后,ATG7基因表达上调;5.同时干扰E2-2和ATG7后,EPCs自噬水平和增殖能力都下降。研究结论:1.E2-2通过下调自噬水平抑制EPCs增殖;2.E2-2对EPCs自噬水平的调节与调控ATG7的转录有关。
【关键词】：E2-2 自噬 内皮祖细胞 增殖
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R54
【目录】：

• 英文缩略词表4-6
• 英文摘要6-8
• 中文摘要8-10
• 第一章 前言10-12
• 第二章 转录因子E2-2 对EPCs增殖及自噬的影响12-33
• 2.1 实验材料和仪器设备12-15
• 2.2 实验方法15-22
• 2.3 结果22-30
• 2.4 讨论30-32
• 2.5 小结32-33
• 第三章 E2-2 通过抑制自噬调控EPCs增殖及其机制33-48
• 3.1 实验材料和仪器设备33-35
• 3.2 实验方法35-39
• 3.3 结果39-45
• 3.4 讨论45-47
• 3.5 小结47-48
• 全文总结48-49
• 参考文献49-54
• 文献综述 自噬在心血管疾病的研究进展54-61
• 参考文献57-61
• 攻读硕士学位期间发表的论文61-62
• 致谢62

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本文编号：982184