GBEE对获得性S180MDR细胞株逆转作用的实验研究

发布时间：2017-04-27 21:13

  本文关键词：GBEE对获得性S180MDR细胞株逆转作用的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：模拟临床PFC(顺铂+氟尿嘧啶+环磷酰胺)联合化疗给药方案,通过体内剂量递增法诱导S180腹水瘤小鼠,获得S180肿瘤多药耐药(Multi-drug resistance, MDR)细胞株并研究银杏外种皮提取物(Ginkgo biloba exocarp extracts, GBEE)对该细胞株体内外的逆转耐药作用及其机制。方法：按临床PFC化疗方案,采用体内剂量递增法诱导S180腹水瘤小鼠,建立获得性S180MDR模型,采用MTT法、流式细胞术动态测定低、中、高剂量所诱导细胞对化疗药物的耐药倍数、细胞内阿霉素(Adriamycin, ADR)积累量及细胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)功能活性以监测所诱导细胞的耐药强度；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定不同剂量所诱导细胞MDR-1mRNA、多药耐药相关蛋白-1(multidrug resistance-associated protein 1, MRP-1) mRNA的表达量。取高剂量诱导的S180MDR细胞研究GBEE的体内外逆转耐药作用。体外实验：采用MTT法测定GBEE对S180MDR细胞的逆转指数,采用流式细胞术测定GBEE对S180MDR细胞内ADR积累量、P-gp功能活性的影响；体内实验：建立ICR小鼠S180MDR细胞腹水瘤和实体瘤模型,将小鼠随机分为14组,每组10只,即空白组,模型组,亲本细胞顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)3mg/kg、ADR3mg/kg单独用药组,耐药细胞DDP3mg/kg、ADR3mg/kg、GBEE50、25、12.5mg/kg、维拉帕米(Verapamil, VER) 15mg/kg单独用药组,GBEE50、25、12.5mg/kg+DDP3mg/kg联合用药组以及VER15mg/kg+DDP3mg/kg联合用药组,药物干预1周。监测腹水瘤小鼠的存活时间、计算实体瘤小鼠的肿瘤抑制率；采用RT-qPCR法检测腹水瘤模型各组小鼠肿瘤细胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表达量；采用双抗夹心ELISA法测定实体瘤模型小鼠血清白介素3 (Interleukin 3,IL-3)、白介素18 (Interleukin 18, IL-18)及γ-干扰素(Interferon-y,IFN-y)的浓度。结果：建模实验结果显示,与亲本细胞比较,低、中、高剂量所诱导的S180细胞对化疗药物的耐药倍数随诱导剂量的增高而逐渐增大,细胞内ADR积累量随之逐渐减少,细胞P-gp功能活性随之逐渐增强；所诱导S180细胞不仅对DDP、氟尿嘧啶(Fluorouracil,FU)产生了较强的耐药性,且对未接触过的、作用机制不同的ADR也具有一定程度的交叉耐药性。所诱导S180细胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表达量与诱导剂量呈正相关。体外实验结果显示：GBEE30、15、7.5μg/mL与S180MDR细胞体外培养后对DDP的逆转指数分别为8.48、11.34、9.88;GBEE各剂量能显著增加S180MDR细胞内ADR蓄积量并抑制P-gp功能活性。体内实验结果显示：GBEE50.25、12.5mg/kg灌胃给药能显著提升DDP的抗肿瘤作用,延长S180MDR腹水瘤小鼠存活时间并抑制小鼠S180MDR实体瘤生长,其中GBEE25mg/kg联合DDP用药组对腹水瘤小鼠的生命延长率达37.41%,对小鼠实体瘤抑制率达65.43%(P0.01或P0.001)；GBEE各剂量能显著抑制小鼠S180MDR腹水瘤细胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表达,且能明显提升S180MDR荷瘤小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ等细胞因子的水平(P0.05)。结论：采用PFC方案按剂量递增法体内诱导S180腹水瘤小鼠获得的MDR细胞模型,其耐药强度在一定的剂量范围内与诱导剂量呈现正相关性。GBEE体内外给药对S180MDR细胞均具有较明显的逆转作用,其机制可能与抑制耐药肿瘤细胞MDR-1mRNA、 MRP-1mRNA的表达,减少耐药蛋白合成,并抑制P-gp功能活性而提高化疗药物在耐药肿瘤细胞内的浓度有关,与提升小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ等细胞因子的水平进而促进了免疫功能也有关。
【关键词】：体内 S180 多药耐药 银杏外种皮提取物 逆转耐药 P-糖蛋白 多药耐药基因-1 多药耐药相关蛋白基因-1 白介素3 白介素18 γ干扰素
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-9
• 符号说明9-10
• 前言10-11
• 1 肿瘤MDR模型建立与中药及其提取物逆转MDR作用研究进展11-19
• 1.1 肿瘤MDR模型的建立方法11-14
• 1.2 中药及其提取物逆转肿瘤MDR作用的研究进展14-19
• 2 技术路线19-20
• 3 实验材料20-23
• 3.1 银杏外种皮提取物20
• 3.2 瘤株与动物20
• 3.3 主要仪器20-21
• 3.4 主要药品与试剂21-23
• 4 实验方法23-29
• 4.1 体内诱导建立S180MDR细胞株及其验证23-25
• 4.1.1 体内诱导建立S180MDR细胞株23
• 4.1.2 MTT法测定耐药倍数23
• 4.1.3 流式细胞术测定细胞内ADR积累量23-24
• 4.1.4 流式细胞术测定P-gp功能活性24
• 4.1.5 RT-qPCR法测定MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表达量24-25
• 4.2 GBEE体外对S180MDR细胞株逆转作用的实验研究25-28
• 4.2.1 GBEE最佳逆转剂量的筛选25
• 4.2.2 对S180MDR细胞逆转指数的影响25-26
• 4.2.3 对S180MDR细胞内ADR积累量的影响26
• 4.2.4 对S180MDR细胞膜P-gp功能活性的影响26-28
• 4.3 GBEE体内对S180MDR腹水瘤逆转作用的实验研究28-29
• 4.3.1 S180MDR腹水瘤模型的建立28
• 4.3.2 分组与给药28
• 4.3.3 检测细胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表达量28
• 4.3.4 检测生存时间、计算生命延长率28-29
• 4.4 GBEE体内对S180MDR实体瘤逆转作用的实验研究29
• 4.4.1 S180MDR实体瘤模型的建立29
• 4.4.2 分组与给药29
• 4.4.3 检测肿瘤质量、计算肿瘤抑制率29
• 4.4.4 检测血清中IL-3、IL-18及IFN-γ的水平29
• 5 实验结果29-43
• 5.1 体内建立S180MDR细胞株的验证29-34
• 5.1.1 细胞耐药倍数29-30
• 5.1.2 细胞内ADR积累量30-31
• 5.1.3 细胞P-gp功能活性31-32
• 5.1.4 细胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表达量32-34
• 5.2 GBEE体外对S180MDR细胞株的逆转作用34-38
• 5.2.1 对S180MDR细胞逆转指数的影响34
• 5.2.2 对S180MDR细胞内ADR积累量的影响34-36
• 5.2.3 对S180MDR细胞膜上P-gp功能活性的影响36-38
• 5.3 GBEE体内对S180MDR腹水瘤的逆转作用38-40
• 5.3.1 对S180MDR腹水瘤小鼠生存时间及生命延长率的影响38
• 5.3.2 对S180MDR腹水瘤细胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA表达量的影响38-40
• 5.4 GBEE体内对S180MDR实体瘤的逆转作用40-43
• 5.4.1 对S180MDR实体瘤小鼠肿瘤质量及肿瘤抑制率的影响40-41
• 5.4.2 对S180MDR实体瘤小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ水平的影响41-43
• 6 讨论与总结43-47
• 6.1 体内建立S180MDR模型43-44
• 6.2 GBEE对S180MDR细胞的逆转作用44-45
• 6.3 GBEE对S180MDR细胞的逆转作用机制45-46
• 6.4 总结46-47
• 参考文献47-58
• 致谢58-59
• 攻读硕士学位期间发表论文及科研情况59-60

【相似文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 胡碧原;GBEE对获得性S180MDR细胞株逆转作用的实验研究[D];扬州大学;2015年

  本文关键词：GBEE对获得性S180MDR细胞株逆转作用的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：331438