β-转折结构对淀粉样MSP2小肽作为抗疟药物/疫苗性质的影响

发布时间：2023-01-15 17:05

　　疟疾是世界上最严重的以虫为媒介的传染性疾病之一,也是世界上最严重的传染病之一,每年全球大约有2亿多人遭到感染,超过40万人死亡。目前,在抗疟疾的研究上,虽然青蒿素在抑制疟疾方面发挥着显著的作用,但是疟原虫对青蒿素等药物的耐药性却不容忽视。因此,有必要研发其它安全高效的抗疟药物/疫苗用于控制疟疾。MSP2是恶性疟原虫裂殖子表面第二丰富的蛋白,在疟原虫表面表现出聚集状态,并以此破坏生物膜参与入侵宿主细胞。MSP2和来源于其功能性N端区域的MSP2衍生多肽已经显示出其作为抗疟疾药物/疫苗的潜能,但是在之前的MSP2相关疫苗研发中,忽略了其聚集和对膜的破坏可能会产生的安全性和有效性的问题。已有研究表明MSP2蛋白N端的MSP21-25序列是形成淀粉样纤维的关键区域,其中MSP28-15序列是形成淀粉样纤维的核心部位,而MSP215-22序列则是MSP2抗原表位所在的区域。在本研究中,我们通过定点插入、定点突变以及片段插入引入β转折序列的方法,设计并化学合成WT-MSP28-22的变体,监测其聚集、与膜的相互作用以及抗原性。其中M5-MSP2小肽（注:之后全文均用M5小肽代替）是插入了一段具有强... 

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
第一章 绪言
    1.1 疟疾防治
    1.2 MSP2及基于MSP2的抗疟药物/疫苗
        1.2.1 MSP2简介
        1.2.2 基于MSP2的抗疟药物/疫苗
    1.3 β-结构对淀粉样纤维蛋白/肽聚集的影响
    1.4 研究目的及意义
    1.5 研究内容
        1.5.1 β-结构对MSP2-N衍生小肽聚集的影响
        1.5.2 β-结构对MSP2-N衍生小肽与膜相互作用的影响
        1.5.3 β-结构对MSP2-N衍生小肽抗原性的影响
    1.6 技术路线
第二章 基于MSP2的抗疟药物/疫苗的设计
    2.1 实验方法
        2.1.1 MSP2多肽的设计
        2.1.2 MSP2多肽的合成及样品制备
        2.1.3 MSP2多肽的二级结构预测
        2.1.4 MSP2多肽的聚集倾向性分析
    2.2 实验结果
        2.2.1 WT-MSP2药物/疫苗候选物区域的选择
        2.2.2 WT-MSP2衍生小肽的设计
        2.2.3 WT-MSP2_(8-22)及其突变体小肽二级结构的预测
        2.2.4 WT-MSP2_(8-22)及其突变体小肽的聚集倾向性分析
    2.3 结果分析
第三章 β-结构对MSP2衍生小肽聚集的影响
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 制备多肽的储备溶液
        3.2.2 ThT荧光检测聚集动力学
        3.2.3 OD_(405nm)浊度检测聚集动力学
        3.2.4 高分辨透射电子显微镜(TEM)
        3.2.5 圆二色谱法(CD)
        3.2.6 分子筛(SEC)
        3.2.7 核磁共振法(NMR)
    3.3 实验结果
        3.3.1 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽的聚集动力学
        3.3.2 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽聚集体的形态
        3.3.3 非聚集性MSP2衍生小肽的结构和状态
        3.3.4 M5-MSP2小肽与WT-MSP2_(8-22)小肽相互作用的聚集动力学
        3.3.5 M5-MSP2小肽与WT-MSP2_(8-22)小肽相互作用的聚集体形态学
    3.4 结果分析
第四章 β-结构对MSP2衍生小肽与膜相互作用的影响
    4.1 实验材料与仪器
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 模拟膜脂质体(SUVs)以及包裹钙黄绿素脂质体的制备
        4.2.2 钙黄绿素荧光泄露实验
        4.2.3 模拟膜与小肽浓度的配置
        4.2.4 ThT荧光检测聚集动力学
        4.2.5 高分辨透射电子显微镜(TEM)
        4.2.6 圆二色谱法(CD)
    4.3 实验结果
        4.3.1 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽在膜环境中的二级结构变化
        4.3.2 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽在膜环境中的聚集动力学
        4.3.3 WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽在膜环境中的聚集体的形态学
        4.3.4 膜在WT-MSP2_(8-22)及其衍生小肽存在时的完整性
    4.4 结果分析
第五章 β-结构对MSP2衍生小肽抗原性的影响
    5.1 实验材料与仪器
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 抗原亲和树脂纯化抗体
        5.2.2 间接性ELISA实验
        5.2.3 多克隆抗体的浓度与小肽浓度比例配置
    5.3 研究结果
        5.3.1 M5多克隆抗体的效价
        5.3.2 WT-MSP2_(8-22)和M5-MSP2在M5多抗存在时的聚集动力学
        5.3.3 WT-MSP2_(8-22)在M5多抗存在时在膜环境中的聚集动力学
        5.3.4 膜在WT-MSP2_(8-22)和M5多克隆抗体存在时的完整性
    5.4 结果分析
第六章 研究讨论
参考文献
致谢
硕士期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]疟疾疫苗研究进展[J]. 陈华,杨恒林.  中国病原生物学杂志. 2010(03)
[2]运用圆二色谱研究酶与化合物相互作用的机理[J]. 沈琼,黄滨,邵嘉亮,彭权,马林,古练权.  中山大学学报(自然科学版). 2006(04)
[3]疟疾疫苗研究的现状和展望[J]. 潘卫庆.  第二军医大学学报. 2004(01)
[4]疟疾疫苗研究概况[J]. 董莹.  中国寄生虫病防治杂志. 2000(03)
[5]超声波用于强化石油醚提取青蒿素[J]. 赵兵,王玉春,吴江,欧阳藩.  化工冶金. 2000(03)
[6]青蒿素研究进展[J]. 刘春朝,王玉春,欧阳藩,叶和春,李国风.  化学进展. 1999(01)
[7]凝胶过滤法测定蛋白质的分子量[J]. 鲁子贤.  生物化学与生物物理进展. 1974(01)



本文编号：3731280