血清高肌酐水平分别对大鼠二甲双胍、氧氟沙星及头孢唑肟肾排泄影响的机制初探

发布时间：2017-05-23 09:04

  本文关键词：血清高肌酐水平分别对大鼠二甲双胍、氧氟沙星及头孢唑肟肾排泄影响的机制初探，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的寻找肾排泄受血清高肌酐水平影响或不影响的药物,并初探其机制,为临床肾功能减退时药物剂量调整提供参考。方法1.将14只Wistar雄鼠随机分为2组：(1)二甲双胍对照组；(2)二甲双胍实验组。于实验前禁食12 h,自由饮水。大鼠用乙醚麻醉后,将一根聚乙烯管插入大鼠右下腹股动脉,另一根聚乙烯管插入尿道。通过尾静脉注射给予对照组大鼠二甲双胍(25mg/kg)溶液、实验组大鼠二甲双胍(25mg/kg)和肌酐(720mg/kg)溶液。于5、10、15、20、30、45、60、120、240、360、480、600 min分别采集血样0.25 ml,并收集0-2 h,2-4 h,4-6 h,6-8 h,8-10 h,10-24 h的尿样。待实验结束后,处死大鼠,取其肾脏,采用Western Blotting测定肾脏组织中有机阳离子转运体2(organic cation transporter 2, OCT2)和多药及毒性化合物外排转运体1(multidrug and toxin extrusion 1, MATE1)的表达量。血浆和尿液样品经处理后,采用HPLC检测二甲双胍浓度,绘制血药浓度-时间曲线和累积尿排泄量-时间曲线,并将相关数据采用DAS 2.0统计软件进行处理,计算其药动学参数(AUC0-t、t1/2、CL、ke等)。此外,采用体外肾切片实验考察高浓度肌酐对二甲双胍摄取的影响：先考察了不同浓度的肌酐对二甲双胍(60μM/600μM)摄取的抑制情况,然后选取浓度为10000μM肌酐考察其对不同浓度二甲双胍(1、10、100、1000、10000μM)摄取的影响。2.将14只Wistar雄鼠随机分为2组：(1)氧氟沙星对照组；(2)氧氟沙星实验组。于实验前禁食12 h,自由饮水。除氧氟沙星给药剂量为80 mg/kg外,其余实验操作及血样、尿样采集均同二甲双胍对照组及实验组。待实验结束后,处死大鼠,取其肾脏,采用Western Blotting测定肾脏组织中有机阴离子转运体3(organic anion transporter 3,OAT3)和多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance protein 2, MRP2)的表达量。血浆和尿液样品经处理后,采用HPLC检测氧氟沙星浓度,绘制血药浓度-时间曲线和累积尿排泄量-时间曲线,并将相关数据采用DAS 2.0统计软件进行处理,计算其药动学参数(AUCo-t、t1/2、CL、ke等)。此外,采用体外肾切片实验通过考察高浓度肌酐(10000 μM)对不同浓度氧氟沙星(1、10、100、1000 μM)摄取的影响。3.将14只Wistar雄鼠随机分为2组：(1)头孢唑肟对照组；(2)头孢唑肟实验组。于实验前禁食12 h,自由饮水。除头孢唑肟给药剂量为300 mg/kg外,其余实验操作及血样、尿样采集均同二甲双胍对照组及实验组。待实验结束后,处死大鼠,取其肾脏,采用Western Blotting测定肾脏组织中有机阴离子转运体3(organic anion transporter 3,OAT3)和多药耐药相关蛋白4(multidrug resistance protein 4,MRP4)的表达量。血浆和尿样经处理后,采用HPLC检测头孢唑肟浓度,绘制血药浓度-时间曲线和累积尿排泄量-时间曲线,并将相关数据采用DAS 2.0统计软件进行处理,计算其药动学参数(AUC0-t、t1/2、CL、ke等)。此外,采用体外肾切片实验通过考察高浓度肌酐(10000 gM)对不同浓度头孢唑肟(1、10、100、500、1000、5000、10000μM)摄取的影响。结果1.实验组二甲双胍在0-2 h,0-4 h,0-6 h,0-8 h,0-10 h,0-24 h的累积尿排泄量(分别为3620.438±303.180μg,3938.058±363.989 μg,4113.592±330.979 μg,4231.314±297.463μg,4291.704±307.830μg,4392.121±303.609μg)较对照组(分别为2920.826±224.088μg,3194.906±259.651μg,3323.875±231.590μg, 3390.747±235.356μg,3431.221±239.132μg,3535.250±229.255μg)均显著降低,且P值小于0.01；血药浓度在给药后的第2、4、6、8、10 h均显著升高,且P值均小于0.05。实验组药动学参数与对照组相比,其AUCo-t和t1/2显著增加(P0.05),CL和Ke显著下降(P0.05)。免疫印迹结果显示,实验组大鼠介导二甲双胍肾小管分泌的转运蛋白OCT2和MATE1的表达量较对照组均无显著性差异(P0.05)。体外肾切片摄取实验结果显示高浓度的肌酐(10000μM)能显著抑制不同浓度的二甲双胍(1、10、100、1000、10000μM)在大鼠肾脏切片的摄取(P0.05)。2.实验组氧氟沙星在0-2 h,0-4 h,0-6 h,0-8 h,0-10 h,0-24 h的累积尿排泄量(分别为1840.071±203.586μg,3273.049±198.067μg,3643.884±233.447 μg,4089-343±117.249 μg,4415.913±198.199μg,4819.527±257.641μg)较对照组(分别为1474.768±303.258μg,3020.918±410.508μg,3706.216±443.377μg, 3993.510±482.005μg,4115.811±445.829μg,4655.141±474.286μg)均无显著性差异,且P值均大于0.05；在给药后的各个时间点,实验组氧氟沙星的血药浓度较对照组均无显著变化,且P值均大于0.05。实验组药动学参数与对照组相比,AUC0-t、t1/2、CL、Ke均无显著性差异(P0.05)。免疫印迹结果显示,实验组介导氧氟沙星肾小管分泌的转运蛋白OAT3和MRP2的表达量较对照组均无显著性差异(P0.05)。体外肾切片摄取实验结果显示高浓度的肌酐(10000μM)对不同浓度氧氟沙星(1、10、100、1000μM)在大鼠肾脏切片的摄取无影响(P0.05)。3.实验组头孢唑肟在0-2 h,0-4 h,0-6 h,0-8 h,0-10 h,0-24 h的累积尿排泄量(分别为31656.600±1629.686 μg,32953.875±1111.083μg,33558.828± 1297.117μg,33686.298±1344.036μg,33750.393±1370.018μg,34026.205± 1502.673μg)较对照组(分别为26046.350±2017.701μg,27180.090±1986.854 μg, .27425.400±2061.078μg,27470.9±2095.863μg,27489.970±2110.554μg, 27612.390±2106.786μg)均显著降低,且P值小于0.01；在给药后的第2、4、6、8、10 h,实验组头孢唑肟的血药浓度均显著高于对照组,且P值均小于0.05。实验组药动学参数与对照组相比,其AUCo-t和t1/2显著增加(P0.05),CL显著下降(P0.05),Ke无显著性变化(P0.05)。免疫印迹结果显示,实验组大鼠介导头孢唑肟肾小管分泌的转运蛋白OAT3和MRP4的表达量较对照组均无显著性差异(P0.05)。体外肾切片摄取实验结果显示高浓度的肌酐(10000 μM)对低浓度(1、10、100、500μM)头孢唑肟在肾脏切片中的摄取无影响(P0.05)；但是能显著抑制高浓度头孢唑肟(1000、5000、10000μM)在肾脏切片中的摄取(P0.01)。结论1.在肾功能正常的情况下,血清高肌酐水平使二甲双胍及头孢唑肟的肾排泄量减少,血药浓度增加,但对介导二甲双胍及头孢唑肟分泌的转运蛋白表达量无影响。此外,体外肾切片摄取实验显示高浓度肌酐能显著抑制二甲双胍及头孢唑肟的摄取。提示：二甲双胍及头孢唑肟可能与肌酐在肾脏的排泄“通道”至少部分相同。2.在肾功能正常的情况下,血清高肌酐水平对氧氟沙星的肾排泄量及血药浓度均无影响,且其对介导氧氟沙星分泌的转运蛋白表达量无影响。此外,体外肾切片摄取实验显示高浓度肌酐对其摄取无影响。提示：氧氟沙星可能与肌酐在肾脏的排泄“通道”各不相同。
【关键词】：血清高肌酐水平 二甲双胍 氧氟沙星 头孢唑肟 肾排泄 排泄“通道”
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要3-6
• Abstract6-10
• 中英文缩略词表10-14
• 第一章 前言14-21
• 1.1 肾脏药物转运蛋白概述14-18
• 1.1.1 有机阴离子转运体14-15
• 1.1.2 有机阴离子转运多肽15
• 1.1.3 ATP-结合盒蛋白15-16
• 1.1.4 有机阳离子转运体16
• 1.1.5 新型有机阳离子转运体16-17
• 1.1.6 多药及毒性化合物外排转运体17
• 1.1.7 寡肽转运体17
• 1.1.8 葡萄糖转运体17-18
• 1.2 药物与肌酐的肾排泄18-20
• 1.3 立题依据20-21
• 第二章 血清高肌酐水平对二甲双胍肾排泄影响的机制初探21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 材料与方法21-27
• 2.2.1 实验仪器21
• 2.2.2 试剂21-22
• 2.2.3 实验动物22
• 2.2.4 二甲双胍的测定22-23
• 2.2.5 肌酐对二甲双胍药动学的影响23
• 2.2.6 肌酐对肾脏转运蛋白OCT2/MATE1表达量的影响23-26
• 2.2.7 肌酐对二甲双胍在大鼠肾脏切片摄取的影响26-27
• 2.3 结果27-31
• 2.3.1 肌酐对二甲双胍药动学的影响27-28
• 2.3.2 肌酐对肾脏转运蛋白OCT2/MATE1表达量的影响28-29
• 2.3.3 肌酐对二甲双胍在大鼠肾脏切片摄取的影响29-31
• 2.4 讨论31-32
• 2.5 结论32-33
• 第三章 血清高肌酐水平对氧氟沙星肾排泄影响的机制初探33-41
• 3.1 引言33
• 3.2 材料与方法33-35
• 3.2.1 实验仪器33
• 3.2.2 试剂33
• 3.2.3 实验动物33
• 3.2.4 氧氟沙星的测定33-34
• 3.2.5 肌酐对氧氟沙星药动学的影响34-35
• 3.2.6 肌酐对肾脏转运蛋白OAT3/MRP2表达量的影响35
• 3.2.7 肌酐对氧氟沙星在大鼠肾脏切片摄取的影响35
• 3.3 结果35-39
• 3.3.1 肌酐对氧氟沙星药动学的影响35-37
• 3.3.2 肌酐对肾脏转运蛋白OAT3/MRP2表达量的影响37
• 3.3.3 肌酐对氧氟沙星在大鼠肾脏切片摄取的影响37-39
• 3.4 讨论39-40
• 3.5 结论40-41
• 第四章 血清高肌酐水平对头孢唑肟肾排泄影响的机制初探41-49
• 4.1 引言41
• 4.2 材料与方法41-43
• 4.2.1 实验仪器41
• 4.2.2 试剂41
• 4.2.3 实验动物41
• 4.2.4 头孢唑肟的测定41-42
• 4.2.5 肌酐对头孢唑肟药动学的影响42
• 4.2.6 肌酐对肾脏转运蛋白OAT3/MRP4表达量的影响42
• 4.2.7 肌酐对头孢唑肟在大鼠肾脏切片摄取的影响42-43
• 4.3 结果43-47
• 4.3.1 肌酐对头孢唑肟药动学的影响43-45
• 4.3.2 肌酐对肾脏转运蛋白OAT3/MRP4表达量的影响45
• 4.3.3 肌酐对头孢唑肟在大鼠肾脏切片摄取的影响45-47
• 4.4 讨论47
• 4.5 结论47-49
• 全文讨论49-51
• 结论51-52
• 研究展望52-53
• 参考文献53-57
• 在学期间的研究成果57-58
• 致谢58

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