靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂荧光偏振高通量筛选模型的建立与应用

发布时间：2024-12-10 04:59

　　 基于荧光偏振(fluorescence polarization, FP)原理,建立并应用以β-catenin/TCF4 (T-cell factor 4)相互作用为靶标的小分子抑制剂荧光偏振高通量筛选模型获得苗头化合物。利用大肠杆菌原核表达系统,原核表达和分离纯化重组人β-catenin,以酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)进行生物学活性鉴定。以异硫氰酸荧光素(fluorescence isothiocyanate, FITC)标记的TCF4多肽为荧光探针,通过优化FITC-TCF4与β-catenin反应浓度,建立并应用靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂荧光偏振高通量筛选模型进行苗头化合物筛选。利用大肠杆菌原核表达系统成功进行了重组人β-catenin原核表达与分离纯化。ELISA实验证实了纯化的重组人β-catenin具有良好的生物学活性。选用20 nmol·L-1FITC-TCF4和100 nmol·L-1β-catenin,成功建立了Z'因子为0.88的荧光偏振高通量筛选模型。应用本筛选模型进...

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
材料与方法
结果
    1 重组人β-catenin原核表达、分离纯化与活性鉴定
    2 荧光探针FITC-TCF4最佳反应浓度的确定
    3 β-Catenin/FITC-TCF4结合反应的稳定性
    4 β-Catenin最佳反应浓度的确定
    5 实验体系对DMSO的耐受性
    6 Z'因子及其他主要技术参数的测定
    7 苗头化合物的筛选与发现
讨论



本文编号：4015652