Asn-145位点在HIV膜融合抑制剂设计中的作用与机制研究

发布时间：2025-01-15 11:48

　　HIV膜融合抑制剂是一种多肽类药物,它通过特异靶向HIV gp41NHR区域,抑制融合过程中核心六螺旋束的形成,从而阻断病毒入侵,在感染的初始阶段切断HIV病毒的传播。2003年,美国FDA批准了临床使用的唯一基于HIV表面融合蛋白gp41靶点的抑制剂恩夫韦肽,即T20。该多肽对逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂耐药及不耐药病人均具有很好的治疗效果,且副作用低,然而T20多肽存在着半衰期短,容易耐药等问题。理想的膜融合抑制剂应具有水溶性好,活性高,稳定,价格低廉等特点,因此亟需设计出一种具有高抗病毒活性,高广谱活性、高抗耐药性和较短片段的膜融合抑制多肽药物。Naito等设计的SC29EK是一个含有E-K模体(X-EE-XX-KK)的29个氨基酸多肽,其活性和抗耐药性较T20均明显提升,为了进一步探究SC29EK作用机制,我们将SC29EK进行逐个截短,结果发现SC29EK与SC28EK之间,仅相差一个氨基酸Asn但是抗病毒活性存在显著差异,这是否提示SC29EK的最后一个氨基酸Asn(位于病毒的gp41-145位点)对多肽与病毒结合有重要作用,据此我们开展了一系列实验。本次研究主要是针对gp4...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图５：?ＥＬＩＳＡ六聚体竞争实验??Ａ：包被识别抗体１７Ｃ８，Ｎ３６为Ｎ肽，检测ＳＣ２９ＥＫ与ＳＣ２８ＥＫ之间差异

的Ｃ肽能通过与Ｎ肽结合而抑制Ｃ３４－Ｂｉｏｔ的结合，最终检测Ｃ３４－Ｂｉｏｔ／Ｎ肽的复??合物的含量从而反映出Ｃ肽的结合能力。本次实验中选用了六聚体识别抗体??ＮＣ－１／１７Ｃ８，二者识别位点略微差异。结果显示如下，图５Ａ中，所用的抗体是??１７－Ｃ８，在与Ｎ３６竞争结合的过程中....

图６：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６复合物在特定条件下形成的晶体??

院北京协和医学院?硕团供氢给１１２４上的０原子，形成一个２．６?Ａ距离的氢键。Ｋ１１３２的０原子，形成３．３?Ａ距离的盐桥。Ｓ１３８的０Ｈ供氢给Ｌ成一个２．６?Ａ距离的氢键。Ｃ肽链内盐桥结构。Ｋ１２２的ＮＨ基基团，二者距离３．９Ａ。??

图７：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６链内作用的示意图??Ａ：图形显示是由Ｐｙｍｏｌ软件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式显示，ＳＣ２９ＥＫ为绿色ａ螺旋链，Ｎ３６为灰白色ａ螺??旋链，虚线表示作用力包括盐桥和氢键

图７：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６链内作用的示意图??图形显示是由Ｐｙｍｏｌ软件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式显示，ＳＣ２９ＥＫ为绿色ａ螺旋链，Ｎ３６为灰，虚线表示作用力包括盐桥和氢键。??示链内作用力，黑色直线为盐桥作用力，绿色直线为氢键。??第二，链间作用，我们发现ＳＣ２９ＥＫ会与相....

图８：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６链间作用力的示意图??Ａ：图形显示是由Ｐｙｍｏｌ软件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式显示，ＳＣ２９ＥＫ为绿色ａ螺旋链，Ｎ３６为灰白色ｃｔ螺??旋链，虚线表示作用力，包括盐桥和氢键

图８：?ＳＣ２９ＥＫ／Ｎ３６链间作用力的示意图??Ａ：图形显示是由Ｐｙｍｏｌ软件展示，氨基酸用ｓｔｉｃｋ模式显示，ＳＣ２９ＥＫ为绿色ａ螺旋链，Ｎ３６为灰白色ｃｔ螺??旋链，虚线表示作用力，包括盐桥和氢键。展示六螺旋束中间区域的作用力情况。??Ｂ：展示展示六螺旋束末端区域作用力。?....

本文编号：4027351