m~6A去甲基化酶FTO调节MZF1基因的验证及其作用位点的鉴定

发布时间：2020-04-19 07:25

【摘要】：N6-甲基腺苷(m~6A)是真核生物mRNA序列中最常见、最丰富的表观修饰之一,该修饰过程是动态可逆的,由甲基转移酶METTL3、WTAP和METTL14催化,并可在去甲基化酶FTO和ALKBH5的作用下去除。m~6A修饰可调控mRNA选择性剪接、翻译和稳定性,m~6A修饰水平的异常可导致多种疾病,其中包括多种恶性肿瘤。m~6A修饰虽然在mRNA的5’UTR、编码区和3'UTR均有发现,但主要富集于终止密码子附近并在多种生物学过程中发挥调节作用,其中包括mRNA稳定性的调节。m~6A主要存在于RRACH基序(R为G或A,H为A、C或U)且其调节作用主要依赖与之结合的蛋白,目前m~6A结合蛋白及其下游的代谢通路已被大量研究,但这些蛋白结合m~6A所需的序列特征尚不明确。而这些序列特征的解析对于最终揭示m~6A的功能与调节机制是不可或缺的。在前期的工作中,我们筛选获得了m~6A去甲基化酶FTO的候选靶基因MZF1并初步确定了位于该基因mRNA终止密码子附近的作用位点。本研究在前期工作的基础上,通过构建FTO敲低和过表达稳转细胞系进一步确定FTO对MZF1基因的调节作用。然后以FTO对MZF1基因mRNA稳定性的调节作为模型,通过对MZF1基因mRNA终止密码子附近的作用位点GGACU的突变、替换及其侧翼序列的截短,利用双荧光素酶实验研究MZF1基因受FTO调节的核心序列及不同RRACH基序的调节效率。本研究可以阐明在m~6A调控mRNA稳定性的过程中,RRCAH基序类型及其侧翼序列对调节功能的影响,初步揭示m~6A调节mRNA稳定性的分子机制,为m~6A调控基因表达的分子机制研究提供重要数据。
【图文】：

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文RRACH 序列，也于 m6A 修饰位点两侧的碱基序列有关。最近尽管随着 m6A 研的热潮大量介导 m6A 修饰的甲基化酶，去甲基化酶，与结合蛋白，，功能与机制研究和揭示，但相关 m6A 发生的碱基序列特征尚不明确，而对于这些基序的研工作对于了解 m6A 的机制与功能是必不可少的。

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文它使用低复杂性区域识别 m6A 修饰暴露的基序，定位于细胞核中，与前体 RNA 结合进而影响 mRNA 的剪切，翻译与表达。通过 m6A 结合蛋白可以将不同的调节或功能机制募集到含 m6A 的 mRNA 中，因此影响靶 mRNA 的命运[25]。
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q78

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本文编号：2633086