濒危植物鄂尔多斯半日花组织培养及植株再生

发布时间：2020-08-07 03:30

【摘要】：鄂尔多斯半日花(Helianthemum ordosicum Y.Z.Zhao,Z.Y.Zhu et R.Cao)为珍稀濒危的第三纪古地中海植物区系残遗种,种群分布面积狭小。本研究以鄂尔多斯半日花无菌苗和成体植株为实验材料,在适宜培养环境中通过改变外源激素的浓度和配比控制外植体定向分化获得试管苗,实验了各生长阶段的适宜培养基种类和激素组系,探讨了光照、pH、外植体种类等因素对半日花组织培养的影响,成功构建了多种外植体组织培养植株再生体系。这一研究对半日花物种保护和种质资源保存有重要意义。主要结果与结论如下:1.半日花无菌苗子叶,真叶,茎尖,带芽茎,无芽茎,成体植株叶片,茎尖,带芽茎,幼嫩无芽茎可以通过组织培养获得再生苗;无菌苗根,成体植株木质化茎段和根不能通过组织培养获得再生苗。2.半日花外植体诱导增殖培养最适光照强度为43-58μmol·m~(-2)·s~(-1),分化培养最适光照强度为45-58μmol·m~(-2)·s~(-1),生根培养最适光照强度为55-70μmol·m~(-2)·s~(-1),加大红光比例可抑制愈伤组织褐化;外植体诱导、增殖、分化、生根最适pH为5.8。3.依次使用75%酒精浸泡30 s,0.5%NaClO_4浸泡8 min,0.1%升汞浸泡8 min消毒处理的外植体愈伤组织诱导成活率最高。外植体消毒的难易程度受到材料幼嫩程度和季节因素影响,幼嫩外植体消毒效果优于老化外植体,6-8月取材外植体消毒效果最好。4.以无菌苗子叶、真叶、无芽茎为外植体,愈伤组织诱导增殖最优培养基为MS+8.0 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA,不定芽分化最优培养基为MS+0.05 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA;生根最优培养基为MS+0.20 mg/L IBA;以成体植株叶片和幼嫩无芽茎为外植体,愈伤组织诱导最优的培养基为MS+2.0 mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA,不定芽分化最优培养基为MS+0.05 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,生根最优培养基为MS+0.2mg/L IBA;以无菌苗和成体植株带芽茎和茎尖为外植体,芽分化最优培养基为MS+0.05 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,生根最优培养基为MS+0.2mg/L IBA。5.无菌苗和成体植株带芽茎和茎尖外植体组织培养形态发生途径为直接器官发生;无菌苗子叶,真叶,无芽茎组织培养形态发生途径为胚状体发生;成体植株幼嫩无芽茎组织培养形态发生途径尚未明确。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：Q943.1
【图文】：

路线图,主要技术,路线

实验主要技术路线

光照强度,根长,愈伤组织

3.1 光照与 pH 对半日花组织培养的影响.1.1 不同光照条件下半日花组织培养效率.1.1.1 不同光照强度下半日花增殖，分化，生根效率在一定范围内，增加光照强度对愈伤组织增殖分化生根有促进作用。不同光照强度下花愈伤组织质量、不定芽平均高度和平均根长变化见图 3.1，光照强度低于 24 μmol·m-2·，半日花外植体诱导率低，愈伤组织生长慢，分化率低，且苗木畸形。随着光照强度增加日花愈伤组织质量，分化苗高，平均根长均呈先升高后降低趋势。

愈伤组织,褐化,光照强度,培养基

图 3.2 光照强度对半日花愈伤组织褐化产生时间的影响Fig.3.2 Effect of illumination intensity on browning time of H.ordosicum callus不同字母代表各处理间差异显著（P<0.05）Different letters represent significant differences between treatments (P<0.05)3.1.2 培养基不同 pH 对半日花组织培养影响培养基 pH 对半日花外植体增殖分化生根过程有影响。实验初期对培养 pH 初步计培养基 pH 在 5-7 之间愈伤组织质量和分化苗高度见图 3.3。培养基 pH 在 5-7 之间花愈伤组织质量和分化苗高度随着 pH 增大呈先升高后降低趋势。不同 pH 值下愈伤组织质量和增殖系数差异显著（P<0.05）。半日花愈伤增长量高度均在培养基 pH 5.8-6.6 水平最高，且显著高于其他水平。培养基 pH 5.4-5.8、6.2愈伤组织质量和分化苗高度均显著高于 5.0-5.4、6.6-7.0 水平，pH 6.2-6.6 和 5.4-5.8 著差异。愈伤组织质量在 pH 6.6-7.0 显著高于 5.0-5.4，分化苗高度在 pH 6.6-7.0 和

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