疯草内生真菌苦马豆素合成基因簇的表达模式分析与swnK基因的敲除
发布时间：2021-04-21 10:00
疯草是豆科棘豆属（Oxytropis）和黄芪属（Astragalus）有毒植物的统称,其主要毒性成分是苦马豆素（swainsonine,SW）,疯草中的苦马豆素主要由链格孢属波状芽管孢组疯草内生真菌（Alternaria Section Undiflum spp）产生。近年研究表明,在产苦马豆素真菌中存在一类结构相似的基因簇,称为苦马豆素合成基因簇（swainsonine biosynthesis gene cluster,SWN）。疯草内生真菌的 SWN基因簇主要由 swnA、swnR、swnN、swnH1、swnH2和swnK等基因组成,这些基因可能在真菌从L-哌可酸到苦马豆素这一合成途径中发挥着重要作用,但在疯草内生真菌中的具体功能仍未得到验证。swnK基因是SWN基因簇中的多功能酶编码基因,由A、KS、AT、SDR、SDRel等多个区域组成,可能在真菌苦马豆素合成中发挥最主要的作用,swnK基因功能的研究,将为进一步阐明疯草内生真菌合成苦马豆素的机理奠定基础。swnK基因是产苦马豆素真菌的特有基因,若针对该基因构建特异性的疯草内生真菌定量检测方法,将为进一步阐释疯草内生真菌在疯...
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词对照
第一章 文献综述
1.1 产苦马豆素疯草内生真菌相关基因的研究进展
1.1.1 疯草内生真菌的分类及其与苦马豆素合成的关系
1.1.2 疯草内生真菌中苦马豆素合成相关基因
1.2 实时荧光定量PCR的研究进展
1.2.1 实时荧光定量PCR的原理
1.2.2 实时荧光定量PCR技术在真菌研究上的应用
1.2.3 实时荧光定量PCR技术在真菌研究中的前景与展望
1.3 基因敲除技术在真菌基因功能研究中的应用
2+介导的同源重组转化"> 1.3.1 原生质体-Ca2+介导的同源重组转化
1.3.2 农杆菌介导的同源重组转化
1.3.3 产苦马豆素疯草内生真菌的相关基因敲除技术研究现状
1.4 本研究目的和意义
第二章 产苦马豆素疯草内生真菌实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 试验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 实时荧光定量PCR引物的特异性
2.2.2 实时荧光定量PCR方法的灵敏度
2.2.3 荧光定量PCR的线性及其范围
2.2.4 黄花棘豆植物各组织部位真菌生物量与苦马豆素含量的检测
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 疯草内生真菌SWN基因簇相关基因表达模式研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 试验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 真菌中的苦马豆素含量
3.2.2 RNA琼脂糖变性电泳及质量结果
3.2.3 内参基因及目的基因引物的特异性检测
3.2.4 不同菌株间SWN基因簇各基因的表达模式
3.2.5 突变位点分析结果
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 产苦马豆素疯草内生真菌swnK基因的敲除
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 试验方法
4.2 结果与分析
4.2.1 第一轮PCR扩增结果
4.2.2 第二轮PCR扩增结果
4.2.3 转化子筛选与PCR法验证
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 全文结论
参考文献
附录1
附录2
附录3
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]小花棘豆内生真菌内参基因的筛选及其Sac表达分析[J]. 赵利娜,卢萍,杜玲,牛艳芳. 基因组学与应用生物学. 2019(11)
[2]直立黄芪中产苦马豆素真菌的分离与鉴定[J]. 余永涛,李金荣,赵清梅,何生虎,陈娟,杨奇,毛彦妮. 畜牧兽医学报. 2018(08)
[3]禾谷镰孢荧光定量检测体系的建立及其在玉米苗枯病上的应用[J]. 葛波,杨洋,张申萍,王晓鸣,陈国康,段灿星. 植物保护学报. 2018(03)
[4]番茄褪绿病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立[J]. 丁天波,刘晓蓓,李洁,魏可可,褚栋. 中国农业科学. 2018(10)
[5]Advance of swainsonine biosynthesis[J]. Xiang-mei Tan,Amanda Juan Chen,Bin Wu,Gui-Shan Zhang,Gang Ding. Chinese Chemical Letters. 2018(03)
[6]变异黄芪中产苦马豆素内生真菌的分离与鉴定[J]. 白晓南,余永涛,赵清梅,何生虎,李金荣. 畜牧与兽医. 2017(10)
[7]波状芽管蠕孢属疯草内生真菌研究进展[J]. 余永涛,赵清梅,何生虎,白晓南. 中国兽医学报. 2016(09)
[8]棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中定殖量的荧光定量PCR检测[J]. 贺字典,宋士清,高玉峰,石延霞,李宝聚. 植物保护学报. 2016(04)
[9]冠突散囊菌不同生长阶段MAT基因的表达量变化[J]. 葛永怡,吴石平,谭玉梅,刘永翔,刘作易. 西南农业学报. 2015(06)
[10]小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备与再生研究[J]. 呼吉雅,卢萍,牛艳芳. 生物技术通报. 2015(05)
博士论文
[1]根癌农杆菌介导的灵芝遗传转化体系的建立及其在灵芝三萜生物合成研究中的应用[D]. 师亮.南京农业大学 2012
[2]产苦马豆素疯草内生真菌的分离鉴定及其遗传多态性研究[D]. 余永涛.西北农林科技大学 2009
[3]内蒙古三种棘豆属植物中苦马豆素相关因子的研究[D]. 卢萍.内蒙古农业大学 2007
硕士论文
[1]甘肃波状芽管孢的鉴定及波状芽管孢真菌LAAO、KS基因的检测[D]. 李金荣.宁夏大学 2018
[2]小麦赤霉菌FGSGL07836基因敲除及功能研究[D]. 彭海丽.内蒙古师范大学 2017
[3]小麦赤霉菌MGV1相关基因FGSG09297的敲除及功能研究[D]. 刘超頔.内蒙古师范大学 2017
[4]疯草棘豆蠕孢菌吡咯啉5-羧化-还原酶基因敲除菌株的构建[D]. 权海云.西北农林科技大学 2017
[5]变异黄芪内生真菌的诱变及SW合成突变菌株的筛选[D]. 白晓南.宁夏大学 2017
[6]柠檬醛对稻瘟病菌几丁质酶基因表达的影响[D]. 张翠荣.贵州大学 2016
[7]疯草内生真菌-Undifilum oxytropis合成苦马豆素的研究[D]. 张蕾蕾.宁夏大学 2014
[8]荧光定量PCR方法在土传烟草青枯病生防研究中的应用[D]. 陈巧玲.南京农业大学 2011
[9]禾谷镰刀菌AMT1基因的功能研究[D]. 王光辉.西北农林科技大学 2010
[10]产苦马豆素真菌的分离鉴定及发酵条件优化[D]. 马尧.西北农林科技大学 2010
本文编号：3151550
【文章来源】：宁夏大学宁夏回族自治区 211工程院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文缩略词对照
第一章 文献综述
1.1 产苦马豆素疯草内生真菌相关基因的研究进展
1.1.1 疯草内生真菌的分类及其与苦马豆素合成的关系
1.1.2 疯草内生真菌中苦马豆素合成相关基因
1.2 实时荧光定量PCR的研究进展
1.2.1 实时荧光定量PCR的原理
1.2.2 实时荧光定量PCR技术在真菌研究上的应用
1.2.3 实时荧光定量PCR技术在真菌研究中的前景与展望
1.3 基因敲除技术在真菌基因功能研究中的应用
2+介导的同源重组转化"> 1.3.1 原生质体-Ca2+介导的同源重组转化
1.3.2 农杆菌介导的同源重组转化
1.3.3 产苦马豆素疯草内生真菌的相关基因敲除技术研究现状
1.4 本研究目的和意义
第二章 产苦马豆素疯草内生真菌实时荧光定量PCR检测方法的建立
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 试验方法
2.2 结果与分析
2.2.1 实时荧光定量PCR引物的特异性
2.2.2 实时荧光定量PCR方法的灵敏度
2.2.3 荧光定量PCR的线性及其范围
2.2.4 黄花棘豆植物各组织部位真菌生物量与苦马豆素含量的检测
2.3 讨论
2.4 小结
第三章 疯草内生真菌SWN基因簇相关基因表达模式研究
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 试验方法
3.2 结果与分析
3.2.1 真菌中的苦马豆素含量
3.2.2 RNA琼脂糖变性电泳及质量结果
3.2.3 内参基因及目的基因引物的特异性检测
3.2.4 不同菌株间SWN基因簇各基因的表达模式
3.2.5 突变位点分析结果
3.3 讨论
3.4 小结
第四章 产苦马豆素疯草内生真菌swnK基因的敲除
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 试验方法
4.2 结果与分析
4.2.1 第一轮PCR扩增结果
4.2.2 第二轮PCR扩增结果
4.2.3 转化子筛选与PCR法验证
4.3 讨论
4.4 小结
第五章 全文结论
参考文献
附录1
附录2
附录3
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]小花棘豆内生真菌内参基因的筛选及其Sac表达分析[J]. 赵利娜,卢萍,杜玲,牛艳芳. 基因组学与应用生物学. 2019(11)
[2]直立黄芪中产苦马豆素真菌的分离与鉴定[J]. 余永涛,李金荣,赵清梅,何生虎,陈娟,杨奇,毛彦妮. 畜牧兽医学报. 2018(08)
[3]禾谷镰孢荧光定量检测体系的建立及其在玉米苗枯病上的应用[J]. 葛波,杨洋,张申萍,王晓鸣,陈国康,段灿星. 植物保护学报. 2018(03)
[4]番茄褪绿病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立[J]. 丁天波,刘晓蓓,李洁,魏可可,褚栋. 中国农业科学. 2018(10)
[5]Advance of swainsonine biosynthesis[J]. Xiang-mei Tan,Amanda Juan Chen,Bin Wu,Gui-Shan Zhang,Gang Ding. Chinese Chemical Letters. 2018(03)
[6]变异黄芪中产苦马豆素内生真菌的分离与鉴定[J]. 白晓南,余永涛,赵清梅,何生虎,李金荣. 畜牧与兽医. 2017(10)
[7]波状芽管蠕孢属疯草内生真菌研究进展[J]. 余永涛,赵清梅,何生虎,白晓南. 中国兽医学报. 2016(09)
[8]棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中定殖量的荧光定量PCR检测[J]. 贺字典,宋士清,高玉峰,石延霞,李宝聚. 植物保护学报. 2016(04)
[9]冠突散囊菌不同生长阶段MAT基因的表达量变化[J]. 葛永怡,吴石平,谭玉梅,刘永翔,刘作易. 西南农业学报. 2015(06)
[10]小花棘豆Embellisia内生真菌原生质体的制备与再生研究[J]. 呼吉雅,卢萍,牛艳芳. 生物技术通报. 2015(05)
博士论文
[1]根癌农杆菌介导的灵芝遗传转化体系的建立及其在灵芝三萜生物合成研究中的应用[D]. 师亮.南京农业大学 2012
[2]产苦马豆素疯草内生真菌的分离鉴定及其遗传多态性研究[D]. 余永涛.西北农林科技大学 2009
[3]内蒙古三种棘豆属植物中苦马豆素相关因子的研究[D]. 卢萍.内蒙古农业大学 2007
硕士论文
[1]甘肃波状芽管孢的鉴定及波状芽管孢真菌LAAO、KS基因的检测[D]. 李金荣.宁夏大学 2018
[2]小麦赤霉菌FGSGL07836基因敲除及功能研究[D]. 彭海丽.内蒙古师范大学 2017
[3]小麦赤霉菌MGV1相关基因FGSG09297的敲除及功能研究[D]. 刘超頔.内蒙古师范大学 2017
[4]疯草棘豆蠕孢菌吡咯啉5-羧化-还原酶基因敲除菌株的构建[D]. 权海云.西北农林科技大学 2017
[5]变异黄芪内生真菌的诱变及SW合成突变菌株的筛选[D]. 白晓南.宁夏大学 2017
[6]柠檬醛对稻瘟病菌几丁质酶基因表达的影响[D]. 张翠荣.贵州大学 2016
[7]疯草内生真菌-Undifilum oxytropis合成苦马豆素的研究[D]. 张蕾蕾.宁夏大学 2014
[8]荧光定量PCR方法在土传烟草青枯病生防研究中的应用[D]. 陈巧玲.南京农业大学 2011
[9]禾谷镰刀菌AMT1基因的功能研究[D]. 王光辉.西北农林科技大学 2010
[10]产苦马豆素真菌的分离鉴定及发酵条件优化[D]. 马尧.西北农林科技大学 2010
本文编号：3151550
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