PRMT5对TRAF2及Nur77的甲基化及相关机制研究

发布时间：2021-04-23 23:16

　　PRMT5是一种II型精氨酸甲基转移酶,可以诱导对称的精氨酸甲基化,甲基化组蛋白和非组蛋白底物的精氨酸残基。研究表明PRMT5在基因转录调控中起着重要作用。已知PRMT5为一种甲基转移酶,且具有众多的底物。因此研究PRMT5的甲基化功能是很有必要的。我们从以下角度探索了PRMT5对肿瘤坏死因子受体相关因子TRAF2和核孤儿受体Nur77的甲基化作用,并进一步对机制进行了探究。第一,我们运用免疫共沉淀、GST-Pulldown及免疫荧光等技术探讨PRMT5与TRAF2的相互作用,并且我们构建了TRAF2不同片段质粒,把相互作用锁定在TRAF2的TRAF结构域。为了进一步研究PRMT5对TRAF2的甲基化作用,我们在293T细胞中分别转染有活性和没有活性的PRMT5,发现有活性的PRMT5可以甲基化TRAF2。同时,我们检测到PRMT5可以调控TRAF2的蛋白表达并在一定程度上促进TRAF2的泛素化。众所周知,TRAF2是NF-κB信号通路中关键衔接蛋白,所以,我们用Western blot检测了PRMT5对NF-κB信号通路中相关蛋白的影响。有意思的是我们发现当在细胞中过表达TRAF2时... 

【文章来源】：广西师范大学广西壮族自治区

【文章页数】：97 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语索引
第一章 前言
    1.1 PRMT5的结构与功能
        1.1.1 精氨酸甲基转移酶的甲基化机制
        1.1.2 PRMT5的结构与功能
    1.2 NF-κB信号通路
        1.2.1 经典的NF-κB
        1.2.2 非经典的NF-κB
    1.3 TRAF2的结构功能介绍
    1.4 Nur77的结构及其功能
    1.5 二氢杨梅素（dihydromyricetin,DHM）
    1.6 Ⅱ型糖尿病
    1.7 本论文的研究目的
    参考文献
第二章 PRMT5 通过甲基化TRAF2 调节TRAF2 介导的非经典NF-κB信号通路
    2.1 引言
    2.2 材料与仪器
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 主要仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养
        2.3.2 PEI转染
        2.3.3 蛋白电泳及免疫印迹
        2.3.4 细胞免疫荧光
        2.3.5 RT-PCR实验
        2.3.6 质粒构建、表达与纯化
    2.4 实验结果
        2.4.1 PRMT5与TRAF2 存在相互作用
        2.4.2 TRAF2 甲基化及PRMT5对TRAF2 的调控作用
        2.4.3 PRMT5 促进TRAF2 的泛素化
        2.4.4 PRMT5对NF-κB信号通路中关键蛋白的影响
        2.4.5 TRAF2/PRMT5对TRAF3及NIK泛素化功能影响
        2.4.6 PRMT5 促进TRAF2与c IAP1 的相互作用
    2.5 讨论
    2.6 小结
    参考文献
第三章 二氢杨梅素靶向PRMT5/Nur77 复合物改善高脂饮食诱导的小鼠II型糖尿病
    3.1 引言
    3.2 实验材料与仪器
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 免疫印迹
        3.3.3 SiRNA转染
        3.3.4 分子对接
        3.3.5 圆二色谱
        3.3.6 等温滴定
        3.3.7 Ⅱ型糖尿病模型
        3.3.8 血浆胰岛素测定
    3.4 实验结果
        3.4.1 PRMT5与Nur77 相互作用并甲基化Nur77
        3.4.2 DHM抑制PRMT5/Nur77 复合物并影响Nur77 磷酸化
        3.4.3 DHM与 Nur77 存在物理结合
        3.4.4 DHM调控AMPK磷酸化并可能与LKB1 相关
        3.4.5 DHM可以治疗Ⅱ型糖尿病并可能靶向Nur77
    3.5 讨论
    3.6 小结
    参考文献
总结与展望
硕士研究生期间发表或待发表的学术论文
致谢



本文编号：3156230