N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的挖掘与应用
发布时间：2021-04-27 12:29
氨基葡萄糖（Glucosamine,GlcN）具有丰富的生物活性,在医药和食品等多个领域得到广泛应用。目前GlcN的生产方法有酸水解法、微生物发酵法和生物催化法。传统的甲壳素酸水解法是GlcN工业化生产的主要途径,但该方法在原料来源、环境保护以及产品安全等方面存在不足。通过微生物发酵法制备N-乙酰氨基葡萄糖（N-Acetyl-D-Glucosamine,GlcNAc）,进一步脱乙酰基获得GlcN近年来已逐渐成为GlcN规模化生物制造的主要途径,然而该方法仍需要再将GlcNAc水解脱乙酰基生成GlcN,过程消耗大量浓酸,极易造成设备腐蚀,且严重污染环境。针对上述问题,本研究旨在发掘高效的N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶,探索GlcNAc的酶法脱乙酰途径,从而取代目前的酸水解脱乙酰法,为实现GlcN的全链条绿色生物制造提供基础。首先,利用生物信息学手段从数据库中筛选得到了 6个不同来源（Thermococcus kodakarensis、Thermococcusprofundus、Thermococcus siculi、Thermococcus sp.2319x1、Thermococcus ce...
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 研究背景与意义
1.2 国内外研究进展
1.2.1 氨基葡萄糖及其生理活性
1.2.2 氨基葡萄糖的应用
1.2.3 氨基葡萄糖的制备方法
1.2.4 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶概述
1.3 研究内容及技术路线
1.3.1 研究目的
1.3.2 研究内容
1.3.3 技术路线
第2章 不同来源N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的克隆表达及纯化
2.1 引言
2.2 材料和仪器
2.3 实验方法
2.3.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因的筛选、合成
2.3.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因重组质粒的构建
2.3.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶在大肠杆菌中的表达、纯化
2.4 结果与讨论
2.4.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因的筛选、合成
2.4.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因重组质粒的构建
2.4.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶在大肠杆菌中的表达、纯化
2.5 本章小结
第3章 不同来源N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的酶学性质表征
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.3 实验方法
3.3.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶酶活力的测定
3.3.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适温度的测定
3.3.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶温度稳定性的测定
3.3.4 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适pH的测定
3.3.5 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶pH稳定性的测定
3.3.6 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶动力学参数的测定
3.4 结果与讨论
3.4.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶活性的测定
3.4.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适温度的测定
3.4.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶温度稳定性的测定
3.4.4 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适pH的测定
3.4.5 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶pH稳定性的测定
3.4.6 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶比酶活的测定
3.4.7 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶动力学参数的测定
3.5 本章小结
第4章 酶解工艺条件优化
4.1 引言
4.2 仪器与方法
4.3 实验方法
4.3.1 反应时间对产率的影响
4.3.2 底物浓度对产率的影响
4.3.3 反应温度对产率的影响
4.4 结果与讨论
4.4.1 反应时间对产率的影响
4.4.2 底物浓度对产率的影响
4.4.3 反应温度对产率的影响
4.5 本章小结
第5章 结论与展望
5.1 主要结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
致谢
攻读硕士论文及专利发表情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]口服氨基葡萄糖硫酸软骨素结合个性化康复训练指导对绝经后女性骨关节损伤的作用分析[J]. 张岚,沈巍,柴澄,华飞. 中国妇幼保健. 2020(08)
[2]盐酸氨基葡萄糖联合透明质酸钠治疗膝骨性关节炎的效果探究[J]. 高文杰. 甘肃科技. 2020(06)
[3]玻璃酸钠联合硫酸氨基葡萄糖治疗膝关节骨性关节炎的效果观察[J]. 杨龙震. 临床医药文献电子杂志. 2020(20)
[4]盐酸氨基葡萄糖联合塞来昔布对踝骨关节炎关节镜术后患者的临床疗效[J]. 宛佳勇. 黑龙江医药. 2019(06)
[5]髌骨内推联合玻璃酸钠、盐酸氨基葡萄糖治疗髌股关节炎的临床观察[J]. 白志林,周熙,撒忠秋. 中国社区医师. 2019(34)
[6]玻璃酸钠联合氨基葡萄糖治疗膝关节骨性关节炎的临床效果研究[J]. 伍俊星. 海峡药学. 2019(11)
[7]微生物法合成N-乙酰氨基葡萄糖及其衍生物的研究进展[J]. 牛腾飞,李江华,堵国成,刘龙,陈坚. 食品与发酵工业. 2020(01)
[8]盐酸氨基葡萄糖联合非甾体抗炎药治疗中度膝关节骨关节炎的临床效果观察[J]. 张鹰,龚青. 当代医学. 2019(23)
[9]氨基葡萄糖片对老年膝关节炎患者临床疗效及炎性因子的影响[J]. 喻刚,吴威甫,周燕. 解放军医药杂志. 2019(06)
[10]盐酸氨基葡萄糖联合青藤碱治疗膝骨关节炎的有效性与安全性[J]. 罗慧臣,胡丹慧. 中成药. 2019(03)
博士论文
[1]酿酒酵母Mek1与Hop1复合物及海环杆菌去乙酰化酶CmCBDA的结构与功能研究[D]. 谢长林.中国科学技术大学 2019
[2]代谢工程改造大肠杆菌发酵生产氨基葡萄糖及过程优化与控制[D]. 陈欣.江南大学 2012
硕士论文
[1]阪崎肠杆菌脱乙酰酶的酶学性质分析和定向改良研究[D]. 王倩.华中农业大学 2016
[2]生物法合成N-乙酰氨基葡萄糖[D]. 王雅婷.北京化工大学 2016
[3]氨基葡萄糖及其美拉德反应衍生物生理功能研究[D]. 唐杰.宁波大学 2012
[4]氨基葡萄糖硫酸盐的制备及其理化性质研究[D]. 曲颖超.大连工业大学 2011
本文编号：3163470
【文章来源】：华东理工大学上海市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
1.1 研究背景与意义
1.2 国内外研究进展
1.2.1 氨基葡萄糖及其生理活性
1.2.2 氨基葡萄糖的应用
1.2.3 氨基葡萄糖的制备方法
1.2.4 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶概述
1.3 研究内容及技术路线
1.3.1 研究目的
1.3.2 研究内容
1.3.3 技术路线
第2章 不同来源N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的克隆表达及纯化
2.1 引言
2.2 材料和仪器
2.3 实验方法
2.3.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因的筛选、合成
2.3.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因重组质粒的构建
2.3.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶在大肠杆菌中的表达、纯化
2.4 结果与讨论
2.4.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因的筛选、合成
2.4.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因重组质粒的构建
2.4.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶在大肠杆菌中的表达、纯化
2.5 本章小结
第3章 不同来源N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶的酶学性质表征
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.3 实验方法
3.3.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶酶活力的测定
3.3.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适温度的测定
3.3.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶温度稳定性的测定
3.3.4 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适pH的测定
3.3.5 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶pH稳定性的测定
3.3.6 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶动力学参数的测定
3.4 结果与讨论
3.4.1 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶活性的测定
3.4.2 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适温度的测定
3.4.3 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶温度稳定性的测定
3.4.4 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶最适pH的测定
3.4.5 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶pH稳定性的测定
3.4.6 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶比酶活的测定
3.4.7 N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶动力学参数的测定
3.5 本章小结
第4章 酶解工艺条件优化
4.1 引言
4.2 仪器与方法
4.3 实验方法
4.3.1 反应时间对产率的影响
4.3.2 底物浓度对产率的影响
4.3.3 反应温度对产率的影响
4.4 结果与讨论
4.4.1 反应时间对产率的影响
4.4.2 底物浓度对产率的影响
4.4.3 反应温度对产率的影响
4.5 本章小结
第5章 结论与展望
5.1 主要结论
5.2 创新点
5.3 展望
参考文献
致谢
攻读硕士论文及专利发表情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]口服氨基葡萄糖硫酸软骨素结合个性化康复训练指导对绝经后女性骨关节损伤的作用分析[J]. 张岚,沈巍,柴澄,华飞. 中国妇幼保健. 2020(08)
[2]盐酸氨基葡萄糖联合透明质酸钠治疗膝骨性关节炎的效果探究[J]. 高文杰. 甘肃科技. 2020(06)
[3]玻璃酸钠联合硫酸氨基葡萄糖治疗膝关节骨性关节炎的效果观察[J]. 杨龙震. 临床医药文献电子杂志. 2020(20)
[4]盐酸氨基葡萄糖联合塞来昔布对踝骨关节炎关节镜术后患者的临床疗效[J]. 宛佳勇. 黑龙江医药. 2019(06)
[5]髌骨内推联合玻璃酸钠、盐酸氨基葡萄糖治疗髌股关节炎的临床观察[J]. 白志林,周熙,撒忠秋. 中国社区医师. 2019(34)
[6]玻璃酸钠联合氨基葡萄糖治疗膝关节骨性关节炎的临床效果研究[J]. 伍俊星. 海峡药学. 2019(11)
[7]微生物法合成N-乙酰氨基葡萄糖及其衍生物的研究进展[J]. 牛腾飞,李江华,堵国成,刘龙,陈坚. 食品与发酵工业. 2020(01)
[8]盐酸氨基葡萄糖联合非甾体抗炎药治疗中度膝关节骨关节炎的临床效果观察[J]. 张鹰,龚青. 当代医学. 2019(23)
[9]氨基葡萄糖片对老年膝关节炎患者临床疗效及炎性因子的影响[J]. 喻刚,吴威甫,周燕. 解放军医药杂志. 2019(06)
[10]盐酸氨基葡萄糖联合青藤碱治疗膝骨关节炎的有效性与安全性[J]. 罗慧臣,胡丹慧. 中成药. 2019(03)
博士论文
[1]酿酒酵母Mek1与Hop1复合物及海环杆菌去乙酰化酶CmCBDA的结构与功能研究[D]. 谢长林.中国科学技术大学 2019
[2]代谢工程改造大肠杆菌发酵生产氨基葡萄糖及过程优化与控制[D]. 陈欣.江南大学 2012
硕士论文
[1]阪崎肠杆菌脱乙酰酶的酶学性质分析和定向改良研究[D]. 王倩.华中农业大学 2016
[2]生物法合成N-乙酰氨基葡萄糖[D]. 王雅婷.北京化工大学 2016
[3]氨基葡萄糖及其美拉德反应衍生物生理功能研究[D]. 唐杰.宁波大学 2012
[4]氨基葡萄糖硫酸盐的制备及其理化性质研究[D]. 曲颖超.大连工业大学 2011
本文编号：3163470
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3163470.html
