Anxa1基因敲除和过表达小鼠的制备及其对小鼠毛囊生长影响的初步探究
发布时间：2021-06-14 03:00
膜联蛋白1（Anxa1）是一种钙依赖的磷脂结合蛋白,在动物、植物、微生物中均有表达,参与多种细胞生理活动。由于小鼠背部皮肤组织中Anxa1基因的表达随着毛囊生长周期的变化而变化,我们推测Anxa1可能是影响毛囊生长发育的关键因子。为了探究Anxa1基因对小鼠毛囊生长发育的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术体系结合显微注射技术制备Anxa1基因的敲除（knockout,KO）和过表达（overexpression,OE）小鼠;通过脱毛诱导实验比较小鼠背部毛发生长的速度;通过组织切片的显微观察统计小鼠背部皮肤组织中毛囊的密度和直径;通过纤维细度仪测量小鼠毛干的直径。通过免疫荧光染色检测小鼠毛囊中Ki-67、CD34的分布;通过qRT-PCR或Western Blot检测小鼠背部皮肤组织中Egf、Notch1、Mkk7的表达水平;通过Western Blot检测小鼠背部皮肤中Akt1、Erk1/2的磷酸化水平。本研究利用CRISPR/Cas9技术体系结合显微注射技术制备Anxa1 KO与OE小鼠,获得4只KO小鼠和5只OE小鼠,阳性率分别为为19.0%和20.8%。10周龄小鼠脱毛诱...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Anxa1过表达载体图谱
张豪 Anxa1 基因敲除和过表达小鼠的制备及其对小鼠毛囊生长影响的初步探究4 实验结果4.1 F0代Anxa1 KO小鼠PCR鉴定结果本研究共移植显微注射胚胎 541 枚，获得 21 只仔鼠，对新生的 21 只仔鼠进行 PCR 鉴定，结果发现，编号分别为 77 号、79 号、81 号、83 号的 F0代小鼠所在泳道出现 300~500bp 目的条带（图 1.3），阳性率为 19.0%。实验重复 3 次所得结果一致，初步断定获得 4 只 F0代 KO 小鼠。
图1.4 F0代Anxa1 KO小鼠的测序结果Figure 1.4 Sequencing results of Anxa1 KO mice in F0generation4.3 F0代Anxa1 OE小鼠PCR鉴定结果本研究共移植原核注射胚胎456枚，获得24只仔鼠，对新生的24只小鼠进行PCR反应鉴定，电泳结果显示5只F0代仔鼠所在泳道出现与预期大小相符的目的条带（图1.5），其编号分别为7号、11号、14号、17号和21号，阳性率为20.8%。Anxa1 OE小鼠。实验重复三次，所得结果一致，初步断定获得5只Anxa1 OE小鼠。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠皮肤切创愈合过程中膜联蛋白A1的表达[J]. 金馨,赵建新,姚艺,黄俊杰,范琰琰,喻林升. 法医学杂志. 2019(01)
[2]利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Irs1）基因[J]. 马元武,马婧,路迎冬,陈炜,张旭,于磊,张连峰. 中国比较医学杂志. 2014(03)
[3]JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达[J]. 王瑞敏,星懿展,郭海英,何龙,杨恬,连小华,查何,彭惠民. 第三军医大学学报. 2012(22)
[4]Overexpression of annexin 1 in pancreatic cancer and its clinical significance[J]. Xiao-Feng Bai Xiao-Guang Ni Ping Zhao Shang-Mei Liu Hui-Xin Wang Bing Guo Lan-Ping Zhou Fang Liu Jin-Sheng Zhang Kun Wang Yong-Qiang Xie Yong-Fu Shao Xiao-Hang Zhao National Laboratory of Molecular Oncology,Department of Abdominal Surgery,Department of Pathology,Cancer Institute and Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100021,China Beijing Yanjing Hospital,Beijing 100037,China Department of Head,Neck and Breast,Mudanjiang Tumor Hospital,Mudanjiang 157009,Heilongjiang Province,China M.D.,Ph.D.. World Journal of Gastroenterology. 2004(10)
本文编号：3228924
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Anxa1过表达载体图谱
张豪 Anxa1 基因敲除和过表达小鼠的制备及其对小鼠毛囊生长影响的初步探究4 实验结果4.1 F0代Anxa1 KO小鼠PCR鉴定结果本研究共移植显微注射胚胎 541 枚，获得 21 只仔鼠，对新生的 21 只仔鼠进行 PCR 鉴定，结果发现，编号分别为 77 号、79 号、81 号、83 号的 F0代小鼠所在泳道出现 300~500bp 目的条带（图 1.3），阳性率为 19.0%。实验重复 3 次所得结果一致，初步断定获得 4 只 F0代 KO 小鼠。
图1.4 F0代Anxa1 KO小鼠的测序结果Figure 1.4 Sequencing results of Anxa1 KO mice in F0generation4.3 F0代Anxa1 OE小鼠PCR鉴定结果本研究共移植原核注射胚胎456枚，获得24只仔鼠，对新生的24只小鼠进行PCR反应鉴定，电泳结果显示5只F0代仔鼠所在泳道出现与预期大小相符的目的条带（图1.5），其编号分别为7号、11号、14号、17号和21号，阳性率为20.8%。Anxa1 OE小鼠。实验重复三次，所得结果一致，初步断定获得5只Anxa1 OE小鼠。
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠皮肤切创愈合过程中膜联蛋白A1的表达[J]. 金馨,赵建新,姚艺,黄俊杰,范琰琰,喻林升. 法医学杂志. 2019(01)
[2]利用CRISPR/Cas9敲除大鼠胰岛素受体底物1（Irs1）基因[J]. 马元武,马婧,路迎冬,陈炜,张旭,于磊,张连峰. 中国比较医学杂志. 2014(03)
[3]JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达[J]. 王瑞敏,星懿展,郭海英,何龙,杨恬,连小华,查何,彭惠民. 第三军医大学学报. 2012(22)
[4]Overexpression of annexin 1 in pancreatic cancer and its clinical significance[J]. Xiao-Feng Bai Xiao-Guang Ni Ping Zhao Shang-Mei Liu Hui-Xin Wang Bing Guo Lan-Ping Zhou Fang Liu Jin-Sheng Zhang Kun Wang Yong-Qiang Xie Yong-Fu Shao Xiao-Hang Zhao National Laboratory of Molecular Oncology,Department of Abdominal Surgery,Department of Pathology,Cancer Institute and Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100021,China Beijing Yanjing Hospital,Beijing 100037,China Department of Head,Neck and Breast,Mudanjiang Tumor Hospital,Mudanjiang 157009,Heilongjiang Province,China M.D.,Ph.D.. World Journal of Gastroenterology. 2004(10)
本文编号：3228924
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3228924.html
