CRISPR系统相关蛋白的纯化与活性分析

发布时间：2023-04-03 17:38

　　目的对CRISPR相关蛋白Cas3、Cas6及Cas9进行表达纯化,并测定其活性。方法在体外构建带有目的基因的质粒,导入大肠杆菌表达系统,通过大肠杆菌的过表达,裂解并提取蛋白,利用His标签,可将目的蛋白纯化出来;通过3种Cas蛋白对不同核酸的切割,分别设计3种核酸底物,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,最终确定Cas蛋白的活性。结果成功表达并纯化得到Cas3、Cas6及Cas93种蛋白,并根据其蛋白特性,与相应的核酸底物进行孵育,在电泳后通过凝胶成像,可观察到3种蛋白均具有活性。结论表达纯化的Cas3、Cas6及Cas9具有生物学功能,为其功能机制研究奠定了基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 蛋白表达
            1.2.1.1 Cas3
            1.2.1. 2 Cas6和Cas9
            1.2.1. 3 纯化与透析
        1.2.2 酶活验证
            1.2.2. 1 Cas3
            1.2.2.2 Cas6
            1.2.2. 3 Cas9
2 结果
    2.1 蛋白的表达与纯化
    2.2 浓度测定
    2.3 Cas3酶活验证
    2.4 Cas6酶活验证
    2.5 Cas9酶活验证
3 讨论



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