大肠杆菌耐药性筛选及艾叶、升麻对环丙沙星耐药性消除的研究

发布时间：2017-10-14 17:08

  本文关键词：大肠杆菌耐药性筛选及艾叶、升麻对环丙沙星耐药性消除的研究

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【摘要】：目的:调查山东省部分地区鸡源大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)耐药表型及血清型分布状况,并研究艾叶、升麻提取物对耐环丙沙星大肠杆菌耐药性的消除作用,减少耐药性的传播,进一步加大对中药的综合开发利用。方法:采用鉴别培养基,革兰氏染色,生化鉴别等方法,分离鉴定2008-2012年来自山东济南、潍坊、烟台、德州、济宁地区大肠杆菌96株,并采用K-B法检测菌株对23种常用抗生素的耐药性,确定菌株的耐药表型,通过玻片凝集反应,确定菌株血清型。采用试管稀释法检测环丙沙星对30株耐环丙沙星大肠杆菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC),挑选对环丙沙星耐药性强的菌株及人工诱导耐药菌株作为本次试验的受试菌株。选择体内外抑菌效果好的艾叶、升麻作为耐药消除剂。观察中药消除剂以1/2 MIC,1/4 MIC,1/8 MIC,作用时间为24 h,48 h对受试菌株的耐药消除作用,采用影印培养法观察耐药消除率,耐药表型变化,并提取受试菌质粒,进行琼脂糖凝胶电泳,观察艾叶、升麻提取物对耐环丙沙星大肠杆菌质粒的消除情况。并通过受试菌株质粒转化抗性筛选,初步探讨菌株耐药消除机制。本次试验以SDS为阳性对照,以菌株自然传代10代为阴性对照,与中药不同提取物消除效果做对比。结果:山东省部分地区鸡源大肠杆菌耐药表型调查结果显示,大肠杆菌对23种抗生素均体现出不同程度的耐药性,且出现多重耐药性,其中对喹诺酮类耐药性已相当严重,对环丙沙星耐药率甚至已达到了77.08%,而且在不同地区,不同年份菌株的耐药率还在不断升高。96株大肠杆菌血清型多集中在024,015,018,这三种血清型为山东省部分地区的流行血清型。根据体内外抑菌单味中药筛选结果表明,艾叶,升麻水煎液能产生有效的抑菌效果,为本次试验中药消除剂。人工诱导标准菌株耐药的结果是环丙沙星对标准菌株的MIC上升到10μg/ml。艾叶、升麻提取物以1/2 MIC,1/4 MIC,1/8 MIC对受试菌分别作用24 h,48 h。中药消除剂对受试菌株均有一定耐药消除作用,但是对耐药表型影响不明显均处于耐药范围内,未恢复菌株的敏感性。艾叶和升麻提取物对不同菌株有一定的消除质粒作用,但是根据质粒转化试验结果判定受试菌株的耐药性产生不一定是由质粒介导的,提示我们主导耐药性消除的途径可能与质粒无直接相关性,可能是由其他多种消除机制调控产生的。结论:本试验结果显示山东省部分地区大肠杆菌已出现严重耐药性,并提示艾叶和升麻对耐环丙沙星菌株有一定的耐药消除作用,具有作为临床大肠杆菌耐药性消除剂的潜力。
【关键词】：耐药性 大肠杆菌 环丙沙星 耐药消除 艾叶 升麻
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S853.7
【目录】：

• 提要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一部分 文献综述12-20
• 1.大肠杆菌病的危害及防治12-13
• 1.1 大肠杆菌生物特性12
• 1.2 大肠杆菌病危害12
• 1.3 大肠杆菌病防治12-13
• 2.大肠杆菌耐药性现状13-15
• 2.1 人源性大肠杆菌耐药现状13
• 2.2 食源性大肠杆菌耐药现状13-14
• 2.3 动物源性大肠杆菌耐药现状14-15
• 3.细菌耐药机制研究进展15-16
• 3.1 遗传耐药机制15
• 3.2 生化机制15-16
• 4.细菌耐药性消除方法研究进展16-20
• 4.1 研发新的抗生素药物16
• 4.2 耐药拮抗剂16
• 4.3 中药耐药消除剂16-20
• 第二部分 大肠杆菌分离鉴定和耐药表型测定20-30
• 1.试验材料20
• 1.1 试验仪器20
• 1.2 试验耗材20
• 1.3 试验试剂20
• 1.4 试验药品20
• 1.5 试验菌株20
• 2.方法20-22
• 2.1 分离鉴定大肠杆菌20-21
• 2.2 分离鉴定菌血清型测定21
• 2.3 分离鉴定菌药敏试验21-22
• 3.试验结果22-28
• 3.1 大肠杆菌的分离鉴定22
• 3.2 大肠杆菌血清型鉴定22-23
• 3.3 药敏试验23-28
• 4.讨论28-30
• 第三部分 受试菌株的选择30-35
• 1.试验材料30
• 1.1 试验仪器30
• 1.2 试验耗材30
• 1.3 试验试剂30
• 1.4 试验药品30
• 1.5 试验菌株30
• 2.方法30-31
• 2.1 临床菌株MIC测定30-31
• 2.2 标准菌株耐药性诱导31
• 3.结果31-33
• 3.1 菌株耐药表型和特性31-32
• 3.2 临床菌株MIC测定结果32-33
• 3.3 标准菌株MIC测定33
• 3.4 标准菌株人工诱导耐药33
• 4.讨论33-35
• 第四部分 中药消除大肠杆菌耐药性研究35-43
• 1.试验材料35-36
• 1.1 试验仪器35
• 1.2 试验试剂35
• 1.3 试验药物35
• 1.4 试验菌株35-36
• 2.方法36-39
• 2.1 中药提取液的制备36
• 2.2 测定提取液对受试菌株MIC36
• 2.3 耐药性消除试验36-39
• 3.结果39-41
• 3.1 药物对受试菌株MIC测定39
• 3.2 耐药性消除结果39-41
• 4.讨论41-43
• 结语43-44
• 参考文献44-48
• 附录48-57
• 致谢57-58
• 论文著作58-63
• 详细摘要63-66

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本文编号：1032152