多花水仙离体培养及多倍体诱导技术研究

发布时间：2017-10-17 22:18

  本文关键词：多花水仙离体培养及多倍体诱导技术研究

  更多相关文章： 漳州水仙 黄花水仙 愈伤组织 秋水仙素 多倍体

【摘要】：多花水仙为石蒜科水仙属多年生球根类花卉,其球茎大,花朵多,开花期长,花香清雅,是具有较高观赏价值和经济价值的一类花卉。由于多花水仙商品球繁殖率低,颜色单一,品种少,故改良水仙品种一直都是科学研究者们的研究重点。离体快速繁殖技术可以在极短的时间内生产大量优质种苗,还可以用于人工种子的生产、原原种保存等工作,同时经过染色体加倍的植株具有外形健壮,鳞片肥厚,高产优质等优点。因此,多花水仙的离体快繁和多倍体诱导的研究具有十分重要的理论和实际意义。本研究以漳州水仙和黄花水仙为试验材料,系统的研究了不同处理对鳞茎不同部位愈伤组织形成及分化的影响,从而筛选出最适漳州水仙和黄花水仙生长的培养基,为漳州水仙和黄花水仙的快速繁殖提供了技术指导,也为多花水仙的遗传转化等研究工作奠定了基础；同时本试验利用秋水仙素直接液体浸泡法和固体培养法来对漳州水仙和黄花水仙进行多倍体诱导,比较了不同浓度秋水仙素和不同时间组合对漳州水仙和黄花水仙的诱变效果,试图探索出诱导多倍体的技术和方法,为培育具有更高观赏价值和经济价值的水仙新品种奠定基础。本研究主要获得以下研究成果：1.用不同部位的水仙带盘鳞片为外植体,以小球茎诱导率和小球茎的质量为主要因素来筛选最佳培养基。漳州水仙外层鳞茎最佳诱导培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L KT,漳州水仙中层鳞茎最佳诱导培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+O.lmg/L KT,黄花水仙外层鳞茎最佳诱导培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L 2,4-D+O.lmg/L KT,黄花水仙中层鳞茎最佳诱导培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D+O.lmg/L KT。2.本试验通过对水仙的外层鳞茎和中层鳞茎进行比较发现,漳州水仙和黄花水仙外层的效果均不佳,容易褐化,影响了愈伤组织及小球茎的诱导。与外层鳞片相比,选择漳州水仙和黄花水仙中层鳞茎作为外植体诱导效果较好。3.在组织培养的基础上,利用秋水仙素的直接液体浸泡法和固体培养法,比较不同秋水仙素浓度和不同时间组合对漳州水仙和黄花水仙的诱变效果。研究结果表明,两种方法均能诱导出多倍体植株,但直接液体浸泡法比固体培养法的诱导率要高,死亡率也较高。4.通过用不同的预处理方法对黄花水仙根尖进行处理可以发现,秋水仙素、8-羟基喹啉、对二氯苯对中期染色体均有一定的凝缩作用,能达到较好的效果,而冰水对染色体的凝缩效果和分散效果均不佳；用0.2%秋水仙素处理8h的染色体形态较好,分散度适中,缢痕区比较清晰；用0.002 mol/L的8-羟基喹啉处理8h的染色体形态最好,分散度最好,缢痕区很清晰；用饱和对二氯苯溶液处理8h的染色体分散程度好,但凝缩效果不是很好,染色体较长,主缢痕和次缢痕不清晰。所以本试验前处理采用0.002 mol/L的8-羟基喹啉液浸泡8 h。5.经秋水仙素诱导的植株与对照组植株比较发现,变异植株鳞茎变大,气孔也显著变大,单位面积内气孔个数明显减少,对变异植株进行染色体鉴定发现,漳州水仙中并未发现六倍体植株,黄花水仙中发现了四倍体植株,同时两种水仙中均出现了非整倍体。
【关键词】：漳州水仙 黄花水仙 愈伤组织 秋水仙素 多倍体
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S682.21
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 缩写词11-12
• 第一章 前言12-22
• 1 多花水仙离体培养技术12-15
• 1.1 低温预处理13
• 1.2 外植体的选择13
• 1.3 外植体的消毒13-14
• 1.4 器官发生途径14
• 1.5 培养基的选择14-15
• 2 植物育种研究进展15-17
• 2.1 传统的育种方法15-16
• 2.1.1 选择育种15
• 2.1.2 杂交育种15-16
• 2.1.3 诱变育种16
• 2.2 现代育种16-17
• 3 多倍体育种的研究进展17-20
• 3.1 多倍体植物的特征17-18
• 3.2 多倍体诱发18-19
• 3.3 植物多倍体的鉴定19-20
• 3.3.1 形态鉴定法19
• 3.3.2 气孔鉴定法19-20
• 3.3.3 染色体计数法20
• 3.3.4 分子水平鉴定法20
• 4 研究的目的和意义20-22
• 第二章 水仙离体再生体系的建立22-36
• 1 材料与方法22-23
• 1.1 供试材料22
• 1.2 试验方法22-23
• 1.2.1 外植体消毒22
• 1.2.2 培养基22-23
• 1.2.3 外植体的接种23
• 1.2.4 继代增殖培养23
• 2 结果与分析23-34
• 2.1 漳州水仙组培苗的生长特性23
• 2.2 相关性分析23-29
• 2.2.1 漳州水仙外层鳞茎生长及分化的相关性分析23-25
• 2.2.2 漳州水仙中层鳞茎生长及分化的相关性分析25-27
• 2.2.3 黄花水仙外层鳞茎生长及分化的相关性分析27-28
• 2.2.4 黄花水仙中层鳞茎生长及分化的相关性分析28-29
• 2.3 6-BA、2,4-D和KT最佳浓度组合的确定29-34
• 2.3.1 3种激素不同浓度组合对漳州水仙外层小球茎诱导影响29-31
• 2.3.2 3种激素不同浓度组合对漳州水仙中层小球茎诱导影响31
• 2.3.3 3种激素不同浓度组合对黄花水仙外层小球茎诱导影响31-32
• 2.3.4 3种激素不同浓度组合对黄花水仙中层小球茎诱导影响32-34
• 3 讨论34-36
• 第三章 秋水仙素诱导多倍体36-45
• 1 材料与方法36-37
• 1.1 供试材料36
• 1.2 实验方法36-37
• 1.2.1 混合培养法36-37
• 1.2.2 浸泡培养法37
• 2 结果与分析37-44
• 2.1 漳州水仙多倍体诱导37-41
• 2.1.1 漳州水仙鳞茎片混合培养法的诱导效果37-38
• 2.1.2 漳州水仙鳞茎片浸泡培养法的诱导效果38-39
• 2.1.3 漳州水仙愈伤组织混合培养法的诱导效果39-40
• 2.1.4 漳州水仙愈伤组织浸泡培养法的诱导效果40-41
• 2.2 黄花水仙多倍体诱导41-44
• 2.2.1 黄花水仙愈伤组织混合培养法的诱导效果41-42
• 2.2.2 黄花水仙愈伤组织浸泡培养法的诱导效果42-44
• 3 讨论44-45
• 第四章 多倍体鉴定45-57
• 1 材料与方法45-47
• 1.1 材料与试剂45
• 1.2 方法45-47
• 1.2.1 预处理45-46
• 1.2.2 固定46
• 1.2.3 解离46
• 1.2.4 压片和染色46
• 1.2.5 镜检46
• 1.2.6 数据统计与分析46
• 1.2.7 多倍体鉴定46-47
• 2 结果与分析47-55
• 2.1 不同预处理对二倍体黄花水仙根尖染色体数目的影响47-49
• 2.2 不同预处理对染色体形态的影响49-52
• 2.3 植株的倍性鉴定52-55
• 2.3.1 形态学鉴定52-53
• 2.3.2 气孔鉴定53-54
• 2.3.3 染色体鉴定54-55
• 3 讨论55-57
• 第五章 小结与展望57-59
• 1 小结57
• 2 创新点57-58
• 3 展望58-59
• 参考文献59-64
• 附录64-71
• 致谢71

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本文编号：1051352