奇异獾蛛的生物生态学及其体内相关酶的活性分析

发布时间：2017-10-24 09:41

  本文关键词：奇异獾蛛的生物生态学及其体内相关酶的活性分析

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【摘要】：奇异獾蛛幼蛛总的发育历期是109-181天,2龄幼蛛的历期是最短的,并随着蜘蛛的生长,各龄期的历期越来越长。3龄之后,蛛体越来越大,蜕皮的间隔期也逐渐延长,4龄之前和6龄之后蜘蛛的生长速度均比较慢,4-6龄之间蜘蛛生长速度最快。同时发现,奇异獾蛛能以成蛛、亚成蛛和幼蛛3种蛛态越冬,并且发现在该蛛的3种越冬蛛态中幼蛛所占比例最多,约为50%。其耐饥耐旱能力与蜘蛛的发育阶段和性别有关,在同期进行的试验中,平均生存天数是成蛛亚成蛛低龄若蛛,雌成蛛雄成蛛。应用滴定法和紫外可见分光光度法研究了不同温度下奇异獾蛛体内脂肪酶和蛋白酶活性。结果表明,非越冬期奇异獾蛛各形态的脂肪酶和蛋白消化酶均高于越冬期。差速离心结果表明,奇异獾蛛体内的消化酶主要存在于胞质溶胶中,在细胞核及碎片中含量较少,这也说明这两种酶在该蛛细胞内主要以可溶性蛋白存在。为了进一步揭示奇异獾蛛的越冬机理,探讨了温度对奇异獾蛛体内乙酰胆碱酯酶(AChE)体躯分布的影响。结果表明：在4℃下奇异獾蛛身体各部分的AchE活性[包括头胸部2.826nmol/(mg·min)、腹部2.564 nmol/(mg·min)、附肢1.054 nmol/(mg·min)]低于在常温下奇异獾蛛身体各部分的AChE活性[包括头胸部3.257nmol/(mg·min)、腹部3.104nmol/(mg·min)、附肢1.082 nmol/(mg·min)],说明低温条件下奇异獾蛛的新陈代谢明显下降。奇异獾蛛体内的AchE主要集中在头胸部,这种分布特征与其生理特性相适应。同时通过聚乙二醇/磷酸盐两相抽提、葡聚糖层析对奇异獾蛛体内的乙酰胆碱酯酶进行了初步分离纯化,并通过分光光度法对纯化的效果进行检测。发现层析后的乙酰胆碱酯酶比活力约是初酶液的两倍,初步实现酶的纯化。
【关键词】：奇异獾蛛 生物生态学 蛋白消化酶 脂肪酶 乙酰胆碱酯酶
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S476.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 前言9-15
• 1.1 稻田蜘蛛研究的意义及国内外研究现状9-15
• 1.1.1 研究稻田蜘蛛的意义与稻田蜘蛛的主要生态特性9-11
• 1.1.2 国内外研究现状11-13
• 1.1.3 ACh的机理13
• 1.1.4 AChE的研究13-15
• 第2章 奇异獾蛛的生物学及越冬生态研究15-19
• 2.1 研究方法15
• 2.1.1 蜘蛛的人工饲养15
• 2.1.2 耐饥耐旱力测定15
• 2.1.3 越冬生态调查15
• 2.2 结果15-17
• 2.2.1 奇异獾蛛的形态特征15-16
• 2.2.2 奇异獾蛛发育的历期16-17
• 2.2.3 幼蛛体重增加与龄期的关系17
• 2.2.4 奇异獾蛛的越冬生态17
• 2.2.5 耐饥耐旱力17
• 2.3 讨论17-19
• 第3章 奇异獾蛛体内主要消化酶的活性分析19-28
• 3.1 研究方法19-23
• 3.1.1 试剂配制与酶液的提取19-21
• 3.1.2 酶活性分析21-23
• 3.2 结果与分析23-26
• 3.2.1 蛋白浓度标准曲线和蛋白酶活性标准曲线的建立23-24
• 3.2.2 蛋白浓度测定的结果24-25
• 3.2.3 蛋白酶活性的测定的结果25
• 3.2.4 脂肪酶活性测定的结果25-26
• 3.3 结论26-28
• 第4章 温度对奇异獾蛛体内乙酰胆碱酯酶活性的影响28-31
• 4.1 材料和方法28-29
• 4.1.1 材料28
• 4.1.2 主要试剂28
• 4.1.3 主要实验仪器28
• 4.1.4 实验方法28-29
• 4.2 结果与分析29-30
• 4.3 讨论30-31
• 第5章 蜘蛛乙酰胆碱酯酶的初步分离纯化31-38
• 5.1 材料与仪器31-32
• 5.1.1 供试蜘蛛31
• 5.1.2 试剂31
• 5.1.3 DEAE-Sephadex A-50预处理和再生31
• 5.1.4 溶液的配制31-32
• 5.1.5 仪器32
• 5.2 实验方法32-34
• 5.2.1 酶源提取与制备32
• 5.2.2 PEG-2000抽提32
• 5.2.3 DEAE Spehadex A-50层析32
• 5.2.4 乙酰胆碱酯酶(AChE)比活力测定32-34
• 5.3 结果与分析34-36
• 5.3.1 总蛋白的标准曲线图34
• 5.3.2 乙憸胆碱醋酶（AChE)的标准曲线图34-35
• 5.3.3 A-50层析图35-36
• 5.3.4 乙酰胆碱酯酶(AChE)比活力的测定36
• 5.4 讨论36-37
• 5.4.1 酶源提取与制备36
• 5.4.2 DEAE Spehadex A-50柱层析36-37
• 5.4.3 酶比活力的测定37
• 5.5 结论37-38
• 参考文献38-41
• 致谢41-42
• 作者简介42

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