猪伪狂犬病病毒HeN1株gE蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

发布时间：2017-12-08 14:08

  本文关键词：猪伪狂犬病病毒HeN1株gE蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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【摘要】：为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E(gE)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达PRV HeN1株截短的gE(aa127~aa232)蛋白(rgE),并对表达的rgE进行纯化免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,以该病毒感染的Vero E6细胞及真核表达的gE蛋白为检测抗原,采用IFA检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗PRV gE的MAb杂交瘤细胞系(mgE185)。该MAb亚型鉴定为Ig G1型,轻链为Κ链。该MAb不具有中和病毒的活性,其细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1∶80和1∶2 560。Western blot试验显示mgE185可以特异性识别gE蛋白,表明其针对的抗原表位为线性表位。通过截短表达gE蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为~(151)IGDYL~(155),该抗原表位在PRV中高度保守。本研究制备的MAb为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRV gE-ELISA检测方法奠定了基础。
【作者单位】： 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点猪病实验室;
【基金】：国家重点研发计划项目(2016YFD0500104) 中国农业科学院基本科研业务费项目(1610302016007)
【分类号】：S852.651
【正文快照】： 伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由PR病毒(PRV)引起的多种家畜、野生动物感染的一种急性传染病[1]。PRV属于疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,猪疱疹病毒Ι型。PR的主要症状为妊娠母猪流产、初生仔猪大量死亡、种猪不育,给养猪业造成了严重的经济损失[2]。自上世纪90年代,我国猪群通过

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