白藜芦醇对过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡的保护作用

发布时间：2018-01-25 00:33

本文关键词： Resveratrol H_2O_2 氧化应激细胞凋亡 IPEC-J2细胞　出处：《吉林大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：氧化应激一直以来是制约养殖业发展的重要因素之一。当机体受到外界有害刺激后,活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度增加,远超过细胞抗氧化保护能力时,机体就会处于氧化应激状态。氧化应激会导致细胞内蛋白质表达异常、脂质和DNA损伤、进一步导致细胞功能紊乱和多种疾病。ROS变化产生的氧化应激能诱发炎症级联反应并导致一系列的组织损伤,很多过氧化物都会导致ROS产量变化,其中过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)就是促成ROS调节氧化应激的一个主要分子。肠上皮细胞中异常的细胞代谢使H_2O_2产量过多,H_2O_2作为有毒的副产物破坏肠粘膜,诱发氧化应激损伤,进一步影响胃肠道屏障功能。近些年已经有大量研究表明H_2O_2介导的氧化应激也是导致多种细胞发生细胞凋亡的主要途径之一。细胞凋亡是指细胞为了维持机体内稳态平衡,受一系列基因控制的细胞自主有序的死亡。多种促凋亡与抗凋亡基因相互作用来维持机体内稳态,例如:现如今参与凋亡的蛋白分子Bcl-2家族就已经有25个家庭成员,分为有抗凋亡作用的Bcl-2亚家族(Mcl-1,Bcl-2,Bcl-w和Bcl-xL)和促凋亡作用的Bax(Bax and Bak)亚家族;Caspase半胱氨酸蛋白酶家族也直接参与凋亡过程,其中caspase3和caspase9在凋亡过程中研究最为广泛,在功能上也与凋亡直接相关。同时氧化应激诱导的细胞凋亡会导致细胞DNA有序片段化,细胞皱缩,细胞核固缩等,所以开发天然抗氧化物对于缓解和保护氧化应激损伤具有重要意义。白藜芦醇(resveratrol,Rel)又称反式(E)-3,5,4'-三羟基芪,是来源于葡萄、花生、桑葚和虎杖等多种植物的天然多酚类化合物。随着人们对自然资源的广泛研究,Rel至少存在于21个科、31个属的72种植物中。目前研究表明,Rel在体内和体外都具有抗氧化、抗癌、抗肿瘤作用。并且已经在多种细胞系上证明,白藜芦醇可以抵抗过氧化氢诱导的氧化应激和细胞凋亡,包括牛乳腺上皮细胞,人结肠癌细胞和人脐静脉血管内皮细胞。IPEC-J2是猪的空肠上皮2段细胞系,广泛用于猪肠道通透性和炎症的研究,对猪的肠道健康疾病研究具有潜在意义。目前,Rel对IPEC-J2细胞的抗氧化作用研究鲜见,具体机制尚未明确。为了明确Rel对过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡的影响,本实验以IPEC-J2细胞为基础,利用H_2O_2建立细胞氧化应激模型,通过分子生物学和细胞生物学实验检测Rel对H_2O_2诱导的细胞凋亡的影响及其发挥作用的分子机制。实验结果表明,50μM的H_2O_2处理IPEC-J2细胞24h后可以诱导细胞凋亡,凋亡率接近40%,而分别使用5,10,25,50μM Rel预处理1h后,再加入50μM的H_2O_2处理细胞24h,25和50μM Rel可以明显抑制IPEC-J2细胞凋亡。同时通过蛋白质免疫印迹实验检测凋亡相关蛋白分子Cleaved caspase3,Bcl-2,Bax和BAD以及信号通路分子ERK1/2,AKT和p-p38的表达量变化,其中H_2O_2处理后,Bcl-2/Bax比值降低,Cleaved caspase3和BAD活化表达增强,加入Rel预处理后,ERK1/2和AKT以及p-p38的表达量均发生变化,上述结果证实,50μM Rel可以活化ERK1/2和AKT信号分子,通过p-p38信号通路抑制H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞凋亡。
[Abstract]:In recent years , there have been a large number of researches on the effects of oxidation stress on oxidative stress induced by oxidative stress and apoptosis , including bovine mammary epithelial cells , human colon cancer cells and human umbilical cord . The results showed that 50 渭M Rel could activate the 1 - / 2 - and 3 - signal molecules and inhibit the apoptosis of IPEC - J2 induced by H _ 2O _ 2 via p - p38 signaling pathway .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S859.7

【参考文献】