基于蛋白质组学初步探究烟粉虱与双生病毒的相互作用
发布时间：2021-03-02 12:01
烟粉虱Bemisia tacbaci（Gennadius）属半翅目（Hemiptera）粉虱科（Aleyraodidae）,是一类世界性重大农业害虫。烟粉虱传播的双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金黄花叶病毒属（Begomovirus）病毒给我国农作物生产构成巨大的威胁。菜豆金黄花叶病毒属病毒经烟粉虱以持久循环型方式传播,它们的外壳蛋白（coat protein,CP）是目前唯一已知参与病毒被烟粉虱特异性传播的结构蛋白。CP可能通过和烟粉虱蛋白发生复杂的相互作用来侵染烟粉虱中肠、唾液腺等组织,从而使病毒成功传播。另外,已知番茄黄曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）进入烟粉虱体内后能激活烟粉虱自噬和抗菌肽等免疫反应,这些免疫反应不利于病毒的侵染及积累。现阶段有关烟粉虱-菜豆金黄花叶病毒属病毒互作的研究比较少,我们对二者复杂互作关系的认识还较为浅显。基于此,本研究借助酵母双杂交核系统筛选了可能和TYLCV CP互作的烟粉虱蛋白,并利用同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolut...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1.1双生病毒基因组结构图
浙江大学硕士学位论文通过酵母双杂交核系统筛选与TYLCVCP互作的烟粉虱蛋白31图3.1酵母双杂交系统筛选与TYLCVCP互作的烟粉虱蛋白。（A）酵母双杂交系统流程图；（B）烟粉虱cDNA文库插入片段的PCR鉴定；（C）使用TYLCVCP抗体通过蛋白质印迹检测pGBKT7-TYLCVCP在酵母菌株中表达（≈46kDa）；（D）诱饵载体pGBKT7-TYLCVCP自激活检测。pGBKT7-p53和pGADT7-LargeT为阳性对照，pGBKT7-p53和pGADT7为阴性对照。Fig3.1IdentificationofwhiteflythatinteractwithTYLCVCPusingtheY2Hsystem.(A)Schematicdiagramofworkflowforthesystem.(B)PCRidentificationofinsertsintheprimarywhiteflycDNAlibrary.(C)ExpressionofpGBKT7-TYLCVCPinyeastwasidentifiedusingwesternblotbyantibodyofTYLCVCP(≈46kDa).(D)Auto-activationdetectionofbaitvectorpGBKT7-TYLCVCPinyeast.pGBKT7-p53andpGADT7-LargeTwereusedaspositivecontrols;pGBKT7-p53andpGADT7wereusedasnegativecontrols.
浙江大学硕士学位论文通过酵母双杂交核系统筛选与TYLCVCP互作的烟粉虱蛋白33SD/-Trp-Leu-His-Ade（含有X-α-Gal和AbA）选择性培养基上生长且变蓝，则说明两个蛋白之间存在互作（图3.2A），并构建互作蛋白之间的网络图（图3.2B）。图3.2烟粉虱蛋白与TYLCVCP蛋白之间的相互作用。（A）采用酵母双杂交核系统验证TYLCVCP与筛选得到的烟粉虱蛋白之间的互作。pGBKT7-TYLCVCP和15个猎物质粒分别共转酵母菌株，并在DDO和QDO/X/A两种选择性培养基上培养生长，pGBKT7-p53和pGADT7-LargeT作为阳性对照（+），pGBKT7-p53和pGADT7作为阴性对照（-）；（B）15个候选烟粉虱蛋白与TYLCVCP蛋白的互作网络。该网络使用Cytoscape生成，红线表示从数据库搜索工具中预测的互作（STRING9.1；http://stringdb.org），黑线代表从酵母双杂交核系统中验证的互作蛋白。Fig3.2InteractionsbetweenwhiteflyproteinsandTYLCVCP.(A)VerificationofinteractionsbetweenTYLCVCPandidentifiedwhiteflyproteinsusingY2Hassay.TYLCVCPand15respectivepreyproteinswereusedtocotransformyeastforgrowthonDDOandQDO/X/Aselectivemedium.pGBKT7-p53andpGADT7-LargeTwereusedaspositivecontrols(+);pGBKT7-p53andpGADT7wereusedasnegativecontrols(-).(B)Proteininteractionnetworkanalysisof15candidatewhiteflyproteinsandTYLCVCP.ThisnetworkwasgeneratedwithCytoscape.Theredlinemeanstheinteractionpredictedfromthedatabasesearchtoolfortheretrievalofinteractingproteins(STRING9.1;http://stringdb.org)，andtheblacklinestandsfortheinteractionsupportedbyY2Hassaysystem.
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟粉虱对菜豆金黄花叶病毒属病毒的传播:病毒对媒介昆虫的适应[J]. 潘李隆,迟瑶,范运运,刘树生. 昆虫学报. 2019(07)
[2]Differential efficiency of a begomovirus to cross the midgut of different species of whiteflies results in variation of virus transmission by the vectors[J]. Lilong Pan,Qunfang Chen,Tao Guo,Xinru Wang,Ping Li,Xiaowei Wang,Shusheng Liu. Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[3]泛素-蛋白酶体系统对烟粉虱体内番茄黄曲叶病毒的影响[J]. 夏文强,梁燕,刘银泉,刘树生,王晓伟. 昆虫学报. 2017(12)
[4]蛋白质组学研究方法及应用的研究进展[J]. 谭伟,黄莉,谢芝勋. 中国畜牧兽医. 2014(09)
[5]吉林番茄黄化曲叶病毒分离物的检测及其DNA-A全基因组序列分析[J]. 王祥,李刚,赵黎明,刘金亮,辛志梅,竺晓平. 植物保护. 2014(02)
[6]PaLCuCNV和TYLCCNV复合侵染引起更严重的番茄黄化曲叶病[J]. 熊艳,周常勇,李茵,王春艳,孙现超,青玲. 园艺学报. 2014(02)
[7]Molecular Detection of TYLCV Isolates from Xinjiang Autonomous Region of China and Analysis of Its DNA-A Genome Sequences[J]. Ding Yingna,Li Shifang,Zhang Sheng,Cui Yuanyu,Yang Hua,He Wei,Sun Xiaojun. Plant Diseases and Pests. 2013(06)
[8]浙江省番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定及序列分析[J]. 袁伟,万红建,王荣青,叶青静,阮美颖,李志邈,周国治,姚祝平,刘云飞,杨悦俭. 分子植物育种. 2013(02)
[9]利用mtCOIPCR-RFLP技术鉴定中国境内九个烟粉虱隐种[J]. 秦丽,王佳,邴孝利,刘树生. 昆虫学报. 2013(02)
[10]昆虫天然免疫反应分子机制研究进展[J]. 张明明,初源,赵章武,安春菊. 昆虫学报. 2012(10)
硕士论文
[1]温州地区番茄黄化曲叶病毒病流行规律与综合防治[D]. 许方程.浙江大学 2011
本文编号：3059223
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1.1双生病毒基因组结构图
浙江大学硕士学位论文通过酵母双杂交核系统筛选与TYLCVCP互作的烟粉虱蛋白31图3.1酵母双杂交系统筛选与TYLCVCP互作的烟粉虱蛋白。（A）酵母双杂交系统流程图；（B）烟粉虱cDNA文库插入片段的PCR鉴定；（C）使用TYLCVCP抗体通过蛋白质印迹检测pGBKT7-TYLCVCP在酵母菌株中表达（≈46kDa）；（D）诱饵载体pGBKT7-TYLCVCP自激活检测。pGBKT7-p53和pGADT7-LargeT为阳性对照，pGBKT7-p53和pGADT7为阴性对照。Fig3.1IdentificationofwhiteflythatinteractwithTYLCVCPusingtheY2Hsystem.(A)Schematicdiagramofworkflowforthesystem.(B)PCRidentificationofinsertsintheprimarywhiteflycDNAlibrary.(C)ExpressionofpGBKT7-TYLCVCPinyeastwasidentifiedusingwesternblotbyantibodyofTYLCVCP(≈46kDa).(D)Auto-activationdetectionofbaitvectorpGBKT7-TYLCVCPinyeast.pGBKT7-p53andpGADT7-LargeTwereusedaspositivecontrols;pGBKT7-p53andpGADT7wereusedasnegativecontrols.
浙江大学硕士学位论文通过酵母双杂交核系统筛选与TYLCVCP互作的烟粉虱蛋白33SD/-Trp-Leu-His-Ade（含有X-α-Gal和AbA）选择性培养基上生长且变蓝，则说明两个蛋白之间存在互作（图3.2A），并构建互作蛋白之间的网络图（图3.2B）。图3.2烟粉虱蛋白与TYLCVCP蛋白之间的相互作用。（A）采用酵母双杂交核系统验证TYLCVCP与筛选得到的烟粉虱蛋白之间的互作。pGBKT7-TYLCVCP和15个猎物质粒分别共转酵母菌株，并在DDO和QDO/X/A两种选择性培养基上培养生长，pGBKT7-p53和pGADT7-LargeT作为阳性对照（+），pGBKT7-p53和pGADT7作为阴性对照（-）；（B）15个候选烟粉虱蛋白与TYLCVCP蛋白的互作网络。该网络使用Cytoscape生成，红线表示从数据库搜索工具中预测的互作（STRING9.1；http://stringdb.org），黑线代表从酵母双杂交核系统中验证的互作蛋白。Fig3.2InteractionsbetweenwhiteflyproteinsandTYLCVCP.(A)VerificationofinteractionsbetweenTYLCVCPandidentifiedwhiteflyproteinsusingY2Hassay.TYLCVCPand15respectivepreyproteinswereusedtocotransformyeastforgrowthonDDOandQDO/X/Aselectivemedium.pGBKT7-p53andpGADT7-LargeTwereusedaspositivecontrols(+);pGBKT7-p53andpGADT7wereusedasnegativecontrols(-).(B)Proteininteractionnetworkanalysisof15candidatewhiteflyproteinsandTYLCVCP.ThisnetworkwasgeneratedwithCytoscape.Theredlinemeanstheinteractionpredictedfromthedatabasesearchtoolfortheretrievalofinteractingproteins(STRING9.1;http://stringdb.org)，andtheblacklinestandsfortheinteractionsupportedbyY2Hassaysystem.
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟粉虱对菜豆金黄花叶病毒属病毒的传播:病毒对媒介昆虫的适应[J]. 潘李隆,迟瑶,范运运,刘树生. 昆虫学报. 2019(07)
[2]Differential efficiency of a begomovirus to cross the midgut of different species of whiteflies results in variation of virus transmission by the vectors[J]. Lilong Pan,Qunfang Chen,Tao Guo,Xinru Wang,Ping Li,Xiaowei Wang,Shusheng Liu. Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[3]泛素-蛋白酶体系统对烟粉虱体内番茄黄曲叶病毒的影响[J]. 夏文强,梁燕,刘银泉,刘树生,王晓伟. 昆虫学报. 2017(12)
[4]蛋白质组学研究方法及应用的研究进展[J]. 谭伟,黄莉,谢芝勋. 中国畜牧兽医. 2014(09)
[5]吉林番茄黄化曲叶病毒分离物的检测及其DNA-A全基因组序列分析[J]. 王祥,李刚,赵黎明,刘金亮,辛志梅,竺晓平. 植物保护. 2014(02)
[6]PaLCuCNV和TYLCCNV复合侵染引起更严重的番茄黄化曲叶病[J]. 熊艳,周常勇,李茵,王春艳,孙现超,青玲. 园艺学报. 2014(02)
[7]Molecular Detection of TYLCV Isolates from Xinjiang Autonomous Region of China and Analysis of Its DNA-A Genome Sequences[J]. Ding Yingna,Li Shifang,Zhang Sheng,Cui Yuanyu,Yang Hua,He Wei,Sun Xiaojun. Plant Diseases and Pests. 2013(06)
[8]浙江省番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定及序列分析[J]. 袁伟,万红建,王荣青,叶青静,阮美颖,李志邈,周国治,姚祝平,刘云飞,杨悦俭. 分子植物育种. 2013(02)
[9]利用mtCOIPCR-RFLP技术鉴定中国境内九个烟粉虱隐种[J]. 秦丽,王佳,邴孝利,刘树生. 昆虫学报. 2013(02)
[10]昆虫天然免疫反应分子机制研究进展[J]. 张明明,初源,赵章武,安春菊. 昆虫学报. 2012(10)
硕士论文
[1]温州地区番茄黄化曲叶病毒病流行规律与综合防治[D]. 许方程.浙江大学 2011
本文编号：3059223
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/zaizhiyanjiusheng/3059223.html
教材专著
