药用植物赤芍的遗传多样性及其芍药苷与气候因子相关性研究
发布时间：2021-04-06 01:23
赤芍作为传统的中药材,需求量大。近年来由于过度采挖导致野生资源匮乏,栽培赤芍成为解决市场供需的重要举措。随着赤芍栽培面积的扩大,在栽培区域出现种质混乱和相似品种混淆的现象。此外,栽培地区的环境因素对赤芍品质的影响也不可忽视。因此,开展赤芍种群遗传多样性及赤芍有效成分与气候因子的相关性研究,对建立赤芍野生资源保护区和加强赤芍品种选育以及赤芍生产区划的制定具有重要意义。本研究利用ISSR和RAPD分子标记对来自内蒙古自治区、黑龙江省和吉林省等地的28个赤芍种群以及安徽省的1个白芍种群进行遗传变异和亲缘关系的研究。同时测定了收集于内蒙古自治区、黑龙江省、河北省等地区共计22份赤芍样品的芍药苷含量,并结合30年的年均降水和年日照时数等气候因素,初步探究赤芍有效成分与气候因子的相关性。研究结果如下:1、采用14个ISSR和14个RAPD引物对赤芍基因组DNA扩增,扩增出的总条带数分别为257,215;多态性条带分别为251,209;多态性比率分别为97.8%,97.2%。2、两种分子标记共同显示野生赤芍种群的遗传多样性比栽培种群高,其中DL种群（内蒙古自治区锡林郭勒盟多伦县）的遗传多样性最高,可...
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
从13个地区收集的赤芍种群分布图（种群缩写在表2.1中给出）
内蒙古大学硕士学位论文13图2.2引物ISSR9退火温度筛选结果Figure2.2ScreeningresultsofprimerISSR9annealingtemperature2.2.3RAPD-PCR扩增2.2.3.1RAPD反应体系的建立DNA浓度按照2.2.2.1下的方法进行筛眩RAPD分子标记的扩增是根据来明达等人[105]描述的方法进行分析的，并做了一些小的修改。反应体系总体积为25μL，包含2μLDNA模板（20ng/μL）、1.5μL引物、10μLddH2O和11.5μLPremixLATaq酶。PCR扩增过程为：94℃预变性5min，以下过程需要进行33个循环，94℃变性45s,引物最佳退火温度复性45s，72℃延伸1.5min，循环结束后，72℃最后延伸7min。使用1.5%琼脂糖凝胶观察扩增的DNA产物，并在UV光下观察通过凝胶记录系统记录结果。2.2.3.2RAPD引物的筛选RAPD引物是从其他关于RAPD分子标记文献[106-109]中获得的，用2个赤芍基因组DNA作为供试样品进行引物的初步筛选，最后选取14条稳定、清晰和多态性条带丰富的引物用于本实验的研究，见表2.3。
内蒙古大学硕士学位论文14表2.3实验所用的RAPD引物及其序列Table2.3RAPDprimersandsequencesusedintheexperiment引物名称引物序列（5′-3′）引物名称引物序列（5′-3′）RAPD1CAGGCCCTTCRAPD8GTTACCGCGARAPD2CAAACGTCGGRAPD9CTGCGTGCTCRAPD3GTCGCCGTCARAPD10CAGCGAGTAGRAPD4GACGGATCAGRAPD11AAGGCCCCTGRAPD5GACGGATCAGRAPD12TGGTTGCGGARAPD6GTCGTTCCTGRAPD13TCGCTGCGGARAPD7ACCTCAGCTCRAPD14CTGTGTGCTC2.2.3.3RAPD引物退火温度的优化与2.2.2.3下的引物退火温度优化方法一样。退火温度分别为41℃、40.4℃、39.4℃、38.4℃、36.8℃、35.3℃、34.4℃和34.0℃，在退火温度为39.4℃时，扩增的条带数较为丰富，条带清晰，分辨率好，因此39.4℃是引物RAPD10的最佳退火温度。如图2.3所示。图2.3引物RAPD10退火温度筛选结果Figure2.3ScreeningresultsofprimerRAPD10annealingtemperature2.2.4赤芍中芍药苷含量的测定2.2.4.1赤芍样品前处理将收集的赤芍样品清洗干净，放入烘箱烘干，使用粉碎机将烘干的赤芍根样品粉碎，并过60目筛，密封干燥保存。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药材祖师麻化学成分与生态因子和土壤因子的相关性研究[J]. 慕祺瑞,姜丹,贺元,耿路,任广喜,白贞芳,张旭,张仲毅,刘春生. 中国中药杂志. 2020(05)
[2]东北红豆杉幼苗黄酮类化合物含量变化及其对气候因子的响应[J]. 张诗行,刘艳红. 生态学杂志. 2020(01)
[3]不同产地白及遗传多态性的RAPD分析[J]. 朱学鑫,陈铌铍,高承贤,丁志山,金波. 中国现代应用药学. 2019(13)
[4]不同种植方式下施肥对栽培赤芍地下生长量的影响[J]. 王立民,吕品,于志民,张继舟. 黑龙江科学. 2019(10)
[5]基于ISSR和SRAP标记的69份红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建[J]. 周兆禧,牛俊海,马蔚红,臧小平,葛宇,王甲水,林兴娥. 中国南方果树. 2018(05)
[6]HPLC法同时测定赤芍中9个活性成分的含量[J]. 王化,何丹娆,朱良玉,于志民,张悦. 中草药. 2018(03)
[7]野生与栽培当归遗传多样性比较[J]. 朱田田,晋玲,黄得栋,卢有媛,李金田,孙少伯. 中草药. 2018(01)
[8]基于RAPD的福建产南方红豆杉遗传多样性研究[J]. 徐雯,瞿印权,张玲玲,荣俊冬,何天友,郑郁善. 中草药. 2017(14)
[9]白芍种质资源的DNA分子标记研究[J]. 徐攀,梁卫青,周洁,张宏建,胡轶娟,程林,浦锦宝. 中华中医药学刊. 2017(04)
[10]光质对紫背天葵生长、次生代谢和抗氧化胁迫的影响[J]. 巩彪,靳志勇,刘娜,刘世琦,王秀峰,艾希珍,魏珉,史庆华. 应用生态学报. 2016(11)
硕士论文
[1]全缘叶绿绒蒿的ISSR和SSR遗传多样性研究[D]. 赵琬玥.西南林业大学 2018
本文编号：3120476
【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
从13个地区收集的赤芍种群分布图（种群缩写在表2.1中给出）
内蒙古大学硕士学位论文13图2.2引物ISSR9退火温度筛选结果Figure2.2ScreeningresultsofprimerISSR9annealingtemperature2.2.3RAPD-PCR扩增2.2.3.1RAPD反应体系的建立DNA浓度按照2.2.2.1下的方法进行筛眩RAPD分子标记的扩增是根据来明达等人[105]描述的方法进行分析的，并做了一些小的修改。反应体系总体积为25μL，包含2μLDNA模板（20ng/μL）、1.5μL引物、10μLddH2O和11.5μLPremixLATaq酶。PCR扩增过程为：94℃预变性5min，以下过程需要进行33个循环，94℃变性45s,引物最佳退火温度复性45s，72℃延伸1.5min，循环结束后，72℃最后延伸7min。使用1.5%琼脂糖凝胶观察扩增的DNA产物，并在UV光下观察通过凝胶记录系统记录结果。2.2.3.2RAPD引物的筛选RAPD引物是从其他关于RAPD分子标记文献[106-109]中获得的，用2个赤芍基因组DNA作为供试样品进行引物的初步筛选，最后选取14条稳定、清晰和多态性条带丰富的引物用于本实验的研究，见表2.3。
内蒙古大学硕士学位论文14表2.3实验所用的RAPD引物及其序列Table2.3RAPDprimersandsequencesusedintheexperiment引物名称引物序列（5′-3′）引物名称引物序列（5′-3′）RAPD1CAGGCCCTTCRAPD8GTTACCGCGARAPD2CAAACGTCGGRAPD9CTGCGTGCTCRAPD3GTCGCCGTCARAPD10CAGCGAGTAGRAPD4GACGGATCAGRAPD11AAGGCCCCTGRAPD5GACGGATCAGRAPD12TGGTTGCGGARAPD6GTCGTTCCTGRAPD13TCGCTGCGGARAPD7ACCTCAGCTCRAPD14CTGTGTGCTC2.2.3.3RAPD引物退火温度的优化与2.2.2.3下的引物退火温度优化方法一样。退火温度分别为41℃、40.4℃、39.4℃、38.4℃、36.8℃、35.3℃、34.4℃和34.0℃，在退火温度为39.4℃时，扩增的条带数较为丰富，条带清晰，分辨率好，因此39.4℃是引物RAPD10的最佳退火温度。如图2.3所示。图2.3引物RAPD10退火温度筛选结果Figure2.3ScreeningresultsofprimerRAPD10annealingtemperature2.2.4赤芍中芍药苷含量的测定2.2.4.1赤芍样品前处理将收集的赤芍样品清洗干净，放入烘箱烘干，使用粉碎机将烘干的赤芍根样品粉碎，并过60目筛，密封干燥保存。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药材祖师麻化学成分与生态因子和土壤因子的相关性研究[J]. 慕祺瑞,姜丹,贺元,耿路,任广喜,白贞芳,张旭,张仲毅,刘春生. 中国中药杂志. 2020(05)
[2]东北红豆杉幼苗黄酮类化合物含量变化及其对气候因子的响应[J]. 张诗行,刘艳红. 生态学杂志. 2020(01)
[3]不同产地白及遗传多态性的RAPD分析[J]. 朱学鑫,陈铌铍,高承贤,丁志山,金波. 中国现代应用药学. 2019(13)
[4]不同种植方式下施肥对栽培赤芍地下生长量的影响[J]. 王立民,吕品,于志民,张继舟. 黑龙江科学. 2019(10)
[5]基于ISSR和SRAP标记的69份红毛丹种质资源DNA指纹图谱构建[J]. 周兆禧,牛俊海,马蔚红,臧小平,葛宇,王甲水,林兴娥. 中国南方果树. 2018(05)
[6]HPLC法同时测定赤芍中9个活性成分的含量[J]. 王化,何丹娆,朱良玉,于志民,张悦. 中草药. 2018(03)
[7]野生与栽培当归遗传多样性比较[J]. 朱田田,晋玲,黄得栋,卢有媛,李金田,孙少伯. 中草药. 2018(01)
[8]基于RAPD的福建产南方红豆杉遗传多样性研究[J]. 徐雯,瞿印权,张玲玲,荣俊冬,何天友,郑郁善. 中草药. 2017(14)
[9]白芍种质资源的DNA分子标记研究[J]. 徐攀,梁卫青,周洁,张宏建,胡轶娟,程林,浦锦宝. 中华中医药学刊. 2017(04)
[10]光质对紫背天葵生长、次生代谢和抗氧化胁迫的影响[J]. 巩彪,靳志勇,刘娜,刘世琦,王秀峰,艾希珍,魏珉,史庆华. 应用生态学报. 2016(11)
硕士论文
[1]全缘叶绿绒蒿的ISSR和SSR遗传多样性研究[D]. 赵琬玥.西南林业大学 2018
本文编号：3120476
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