胸膜肺炎放线杆菌四川分离株的生物学特性研究

发布时间：2017-04-20 20:31

  本文关键词：胸膜肺炎放线杆菌四川分离株的生物学特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)能够引起猪患传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP),给我国乃至全球养猪业带来了重大损失。本研究进行了APP的分离鉴定及其生物学特性研究,主要研究如下：从来自四川广安、眉山等地区疑似病料中进行APP分离,经分离培养、溶血现象、“卫星’现象、染色镜检、PCR、生化特性等鉴定,共分离获得9株胸膜肺炎放线杆菌(分别命名为SC-GA.SC-MS1～SC-MS8).对分离株进行PCR鉴定均能扩增出大小约422bp的目的条带；对分离株分别提取酚水抗原同标准阳性血清做琼扩血清型鉴定,分离自广安病猪关节积液的SC-GA株为血清7型,分离白眉山病猪的脾脏SC-MS5株、肺脏SC-MS1.SC-MS2.SC-MS3.SC-MS4.SC-MS6.SC-MS7.SC-MS8等7株均为血清1型。分别对9株分离株进行药物敏感试验的研究,结果表明9株分离株均对庆大霉素、卡那霉素、四环素、林可霉素、红霉素耐药；均对诺氟沙星、环丙沙星等喹诺酮类,头孢唑林、头孢哌酮／舒巴坦等头孢类,以及氟苯尼考、阿莫西林等敏感；除SC-GA外,其他分离株均对青霉素G敏感；除SC-GA.SC-MSI外,其他分离株均对氨苄西林敏感SC-GA对青霉素G、氨苄西林耐药。本研究揭示临床对APP的预防和治疗用药,应选择青霉素类、头孢类、喹诺酮类等,避免使用氨基糖苷类和大环内酯类药物。对分离株之间毒力大小进行比较研究,发现血清1型分离株毒性明显比7型分离株强,且1型分离株之间毒性也有较大差异。选取一株毒性最强1型分离株(SC-MS5)和一株血清7型分离株(SC-GA)分别进行了毒力测定研究。测定分离株对小鼠的半数致死量,并观察对小鼠的致病性。研究结果表明SC-MS5株和SC-GA株对小鼠均有较强的致病性,其中SC-MS5株的半数致死量为5.4378×107CFU,SC-GA株的半数致死量为1.9543×108CFU。2株分离株均能引起小鼠产生明显的胸膜肺炎症状及病理变化：呼吸困难、精神萎靡：肺脏出血、粘连,脾脏淤血肿大等。利用SC-MS5 1型株和SC-GA7型株制备灭活苗对小鼠进行免疫,免疫结束后1 4d对小鼠进行10LD50攻毒。检测首免前、二免前、攻毒前血清的抗体水平,发现免疫后血清抗体水平明显上升,且二免后上升明显。在对小鼠的保护方面,SC-GA7型分离株灭活苗对自身的免疫保护率为66.7%,SC-MS51型分离株灭活苗对自身的免疫保护率为83.3%；二价苗对各自的保护率均为83.3%。结果表明,分离株具有较好的免疫原性。本研究对丰富四川地区APP的病原学资料及猪传染性胸膜肺炎临床防治用药提供科学依据,对四川地区APP的防治具有一定临床实际指导意义。
【关键词】：四川 胸膜肺炎放线杆菌 分离鉴定 生物学特性
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.6
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-7
• 缩略语表7-11
• 第一章 文献综述11-21
• 1 病原学11-15
• 1.1 历史及归类11
• 1.2 病原形态与染色特性11
• 1.3 生化特性11
• 1.4 生长及培养特性11-12
• 1.5 耐药性与抵抗力12
• 1.6 生物型与血清型12-13
• 1.7 致病因子13-15
• 1.8 致病机理及病理变化15
• 2 猪传染性胸膜肺炎及其危害15-16
• 3 猪传染性胸膜肺炎的诊断16-19
• 3.1 临床诊断16-17
• 3.2 病原分离诊断17
• 3.3 分子生物学方法诊断17-18
• 3.4 血清学方法诊断18-19
• 4 猪传染性胸膜肺炎的流行情况19
• 5 猪传染性胸膜肺炎的防治19-20
• 6 研究的目的与意义20-21
• 第二章 胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定及其生物学特性研究21-50
• 1 材料21-22
• 1.1 试验材料21
• 1.2 试验动物21
• 1.3 培养基及其制备方法21
• 1.4 病料来源21-22
• 1.5 主要试剂及仪器22
• 2 方法22-29
• 2.1 病料采集22-23
• 2.2 APP的分离鉴定23-24
• 2.3 生长形态观察24-25
• 2.4 镜检形态观察25
• 2.5 卫星现象观察25
• 2.6 NAD依赖试验25
• 2.7 溶血现象观察25
• 2.8 药敏试验25
• 2.9 生化试验25-26
• 2.10 血清型鉴定26-27
• 2.11 生长曲线测定27
• 2.12 对小鼠的致病性试验27-28
• 2.13 对小鼠免疫保护力研究28-29
• 3 结果29-45
• 3.1 细菌的分离鉴定29-32
• 3.2 生长特性32
• 3.3 镜检形态32-33
• 3.4 卫星现象33
• 3.6 溶血现象33-34
• 3.7 药敏试验结果34-35
• 3.8 生化试验结果35
• 3.9 血清型鉴定结果35-37
• 3.10 生长曲线测定结果37-38
• 3.11 对小鼠致病性结果38-42
• 3.12 对小鼠攻毒后的保护情况42-45
• 4 讨论45-48
• 4.1 病料采集及细菌的分离鉴定45-46
• 4.2 药敏试验46
• 4.3 血清型鉴定46-47
• 4.4 生长曲线47
• 4.5 对小鼠免疫保护47-48
• 5 小结48-50
• 5.1 分离鉴定48
• 5.2 生长特性48
• 5.3 形态特性48-49
• 5.4 耐药特性49
• 5.5 生化特性49
• 5.6 对小鼠的致病性49
• 5.7 对小鼠的免疫保护49-50
• 第三章 结论50-51
• 参考文献51-57
• 致谢57

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