氟苯虫酰胺抗性对小菜蛾生殖的影响机制初探
发布时间：2021-11-21 13:26
小菜蛾（Plutella xylostella L.）为重要的十字花科蔬菜害虫,因其生命周期短、世代重叠严重、繁殖能力强以及生产中不合理用药,使得其对绝大多数杀虫剂产生了抗药性。氟苯虫酰胺因其新颖的作用靶标,良好的速效、持效性以及对哺乳动物的低毒性等优势而得到广泛应用,但小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性问题也越来越突出。为探讨小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性与生殖发育之间的关系,本项目以敏感品系（S）、室内筛选的氟苯虫酰胺抗性品系（Rf）、田间抗性种群（Rb）三个品系/种群为研究对象,分别利用荧光定量PCR和超高效液相串联质谱法等多种方法开展研究,得到的结果如下:1.在前期抗性汰选的基础上,继续采用浸渍法获得了对氟苯虫酰胺抗性达946.95倍的高抗小菜蛾品系（Rf）,且鱼尼丁受体4946位点基因型为GAG。测得小菜蛾田间抗性种群（Rb）对氟苯虫酰胺的抗性倍数1115.06倍。2.为进一步研究小菜蛾生殖与抗性之间的作用机制,用荧光定量PCR分析比较抗性小菜蛾和敏感品系小菜蛾成虫卵黄原蛋白（PxVg）基因、卵黄原蛋白受...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性发展规律
山东农业大学硕士学位论文223.2不同品系/种群小菜蛾生殖相关基因表达差异与酶活性分析3.2.1小菜蛾总RNA提取及cDNA合成图21.0%琼脂糖凝胶电泳总RNA检测Fig.2TotalRNAdetectionon1.0%agarosegelelectrophoresis注：由左及右依次为S、Rf、Rb。Note:S、Rf、Rbfromlefttoright通过BioTekEPOCH2检测小菜蛾总RNA的提取质量，以ddH2O作为空白对照，结果表明，提取的小菜蛾总RNA的OD260/OD280值均在1.8～2.2之间，且浓度均大于500ng/μL，说明提取的RNA纯度较好，无蛋白质和DNA污染。通过凝胶电泳检测RNA完整性，结果显示28S、18S和5S条带清晰（图2），由于昆虫的总RNA在电泳条件下28SrRNA的氢键易断裂（Winnebecketal.,2010），从而使28S亮度减弱。可知RNA样品完整性良好，质量合格，可用于后续cDNA的合成。3.2.2引物验证通过1.0%琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增目的片段的检测结果显示（图3），产物片段大小与预期一致均在200bp以内，目的条带清晰单一，无引物二聚体及非特异性扩增条带。依据Bustin等对qPCR引物质量提出的要求，从图4中看所有引物扩增的溶解峰单一，且溶解温度均大于80℃，通过图5结果显示R2均大于0.98，所有引物扩增的Ct-LogC斜率均在-3.58~-3.10之间，扩增效率均在90%~110%之间，均符合要求，说明引物质量合格，可以用于后续的荧光定量PCR实验。
氟苯虫酰胺抗性对小菜蛾生殖的影响机制初探23图36对不同引物的小菜蛾PCR扩增结果1-6分别为RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.3PCRamplificationresultsofP.xylostellawith6differentprimerpairs1-6areRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.图4小菜蛾基因的荧光定量PCR溶解曲线A-F分别为RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.4FluorescencequantitativePCRdissolutioncurveA-FareRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.
【参考文献】：
期刊论文
[1]甜菜夜蛾卵黄原蛋白受体基因的RNA干扰[J]. 赵静,陶蓉,郝德君,肖留斌,谭永安. 中国农业科学. 2019(01)
[2]蜕皮激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控[J]. 沈关望,林英,吕毅华,王继岩,邢润苗,夏庆友. 中国生物化学与分子生物学报. 2014(11)
[3]三唑磷和毒死蜱亚致死剂量对大螟种群增长和卵黄蛋白含量的影响[J]. 杨国庆,李丽,戈林泉,吴进才. 应用昆虫学报. 2014(06)
[4]葱蝇海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滞育相关表达[J]. 李源,郝友进,张玉娟,司风玲,陈斌. 昆虫学报. 2013(04)
[5]昆虫海藻糖酶的基因特性及功能研究进展[J]. 唐斌,魏苹,陈洁,王世贵,张文庆. 昆虫学报. 2012(11)
[6]氯虫苯甲酰胺对小菜蛾生长发育的亚致死效应研究[J]. 尹飞,冯夏,胡珍娣,李振宇,林庆胜,张德雍,陈焕瑜. 广东农业科学. 2012(17)
[7]三种杀虫剂对褐飞虱海藻糖含量和海藻糖酶活性的影响[J]. 赵克非,戈林泉,程耀,吴进才,杨国庆. 昆虫学报. 2011(07)
[8]昆虫几丁质合成及其调控研究前沿[J]. 张文庆,陈晓菲,唐斌,田宏刚,陈洁,姚琼. 应用昆虫学报. 2011(03)
[9]小菜蛾阿维菌素和虫酰肼抗性品系对几种新型药剂的交互抗性研究[J]. 殷茜,钱路,曹广春,韩召军. 南京农业大学学报. 2010(05)
[10]小菜蛾对阿维菌素的抗性风险评估及交互抗性的室内测定[J]. 梁延坡,吴青君,张友军,徐宝云,谢圣华,吉训聪. 热带生物学报. 2010(03)
硕士论文
[1]江原钝绥螨卵黄原蛋白基因的克隆与表达分析[D]. 高尚仁.南昌大学 2018
[2]抗氟苯虫酰胺小菜蛾的转录组学和蛋白质组学研究[D]. 王成花.山东农业大学 2018
[3]食物和杀虫剂对黑肩绿盲蝽生长、发育和生殖的影响[D]. 刘陈.扬州大学 2017
[4]小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的室内与田间抗性的异同研究[D]. 秦超.山东农业大学 2017
[5]小菜蛾保幼激素受体基因的分子特性及生殖调控作用研究[D]. 杨一帆.福建农林大学 2017
[6]小菜蛾卵黄原蛋白受体基因的克隆与表达模式分析[D]. 王加伟.福建农林大学 2016
[7]小菜蛾卵黄原蛋白基因的克隆、表达模式与功能分析[D]. 邹明民.福建农林大学 2015
[8]马铃薯甲虫保幼激素合成与信号转导相关基因的克隆和功能分析[D]. 周立涛.南京农业大学 2013
[9]亚剂量氟铃脲对昆虫免疫的干扰机制及血细胞高通量药物筛选[D]. 贺媛.华东理工大学 2011
[10]吡虫啉对烟粉虱实验种群的亚致死影响[D]. 吴咚咚.福建农林大学 2009
本文编号：3509591
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
小菜蛾对氟苯虫酰胺的抗性发展规律
山东农业大学硕士学位论文223.2不同品系/种群小菜蛾生殖相关基因表达差异与酶活性分析3.2.1小菜蛾总RNA提取及cDNA合成图21.0%琼脂糖凝胶电泳总RNA检测Fig.2TotalRNAdetectionon1.0%agarosegelelectrophoresis注：由左及右依次为S、Rf、Rb。Note:S、Rf、Rbfromlefttoright通过BioTekEPOCH2检测小菜蛾总RNA的提取质量，以ddH2O作为空白对照，结果表明，提取的小菜蛾总RNA的OD260/OD280值均在1.8～2.2之间，且浓度均大于500ng/μL，说明提取的RNA纯度较好，无蛋白质和DNA污染。通过凝胶电泳检测RNA完整性，结果显示28S、18S和5S条带清晰（图2），由于昆虫的总RNA在电泳条件下28SrRNA的氢键易断裂（Winnebecketal.,2010），从而使28S亮度减弱。可知RNA样品完整性良好，质量合格，可用于后续cDNA的合成。3.2.2引物验证通过1.0%琼脂糖凝胶电泳对PCR扩增目的片段的检测结果显示（图3），产物片段大小与预期一致均在200bp以内，目的条带清晰单一，无引物二聚体及非特异性扩增条带。依据Bustin等对qPCR引物质量提出的要求，从图4中看所有引物扩增的溶解峰单一，且溶解温度均大于80℃，通过图5结果显示R2均大于0.98，所有引物扩增的Ct-LogC斜率均在-3.58~-3.10之间，扩增效率均在90%~110%之间，均符合要求，说明引物质量合格，可以用于后续的荧光定量PCR实验。
氟苯虫酰胺抗性对小菜蛾生殖的影响机制初探23图36对不同引物的小菜蛾PCR扩增结果1-6分别为RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.3PCRamplificationresultsofP.xylostellawith6differentprimerpairs1-6areRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.图4小菜蛾基因的荧光定量PCR溶解曲线A-F分别为RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.4FluorescencequantitativePCRdissolutioncurveA-FareRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.
【参考文献】：
期刊论文
[1]甜菜夜蛾卵黄原蛋白受体基因的RNA干扰[J]. 赵静,陶蓉,郝德君,肖留斌,谭永安. 中国农业科学. 2019(01)
[2]蜕皮激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控[J]. 沈关望,林英,吕毅华,王继岩,邢润苗,夏庆友. 中国生物化学与分子生物学报. 2014(11)
[3]三唑磷和毒死蜱亚致死剂量对大螟种群增长和卵黄蛋白含量的影响[J]. 杨国庆,李丽,戈林泉,吴进才. 应用昆虫学报. 2014(06)
[4]葱蝇海藻糖-6-磷酸合成酶基因的克隆、序列分析及滞育相关表达[J]. 李源,郝友进,张玉娟,司风玲,陈斌. 昆虫学报. 2013(04)
[5]昆虫海藻糖酶的基因特性及功能研究进展[J]. 唐斌,魏苹,陈洁,王世贵,张文庆. 昆虫学报. 2012(11)
[6]氯虫苯甲酰胺对小菜蛾生长发育的亚致死效应研究[J]. 尹飞,冯夏,胡珍娣,李振宇,林庆胜,张德雍,陈焕瑜. 广东农业科学. 2012(17)
[7]三种杀虫剂对褐飞虱海藻糖含量和海藻糖酶活性的影响[J]. 赵克非,戈林泉,程耀,吴进才,杨国庆. 昆虫学报. 2011(07)
[8]昆虫几丁质合成及其调控研究前沿[J]. 张文庆,陈晓菲,唐斌,田宏刚,陈洁,姚琼. 应用昆虫学报. 2011(03)
[9]小菜蛾阿维菌素和虫酰肼抗性品系对几种新型药剂的交互抗性研究[J]. 殷茜,钱路,曹广春,韩召军. 南京农业大学学报. 2010(05)
[10]小菜蛾对阿维菌素的抗性风险评估及交互抗性的室内测定[J]. 梁延坡,吴青君,张友军,徐宝云,谢圣华,吉训聪. 热带生物学报. 2010(03)
硕士论文
[1]江原钝绥螨卵黄原蛋白基因的克隆与表达分析[D]. 高尚仁.南昌大学 2018
[2]抗氟苯虫酰胺小菜蛾的转录组学和蛋白质组学研究[D]. 王成花.山东农业大学 2018
[3]食物和杀虫剂对黑肩绿盲蝽生长、发育和生殖的影响[D]. 刘陈.扬州大学 2017
[4]小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的室内与田间抗性的异同研究[D]. 秦超.山东农业大学 2017
[5]小菜蛾保幼激素受体基因的分子特性及生殖调控作用研究[D]. 杨一帆.福建农林大学 2017
[6]小菜蛾卵黄原蛋白受体基因的克隆与表达模式分析[D]. 王加伟.福建农林大学 2016
[7]小菜蛾卵黄原蛋白基因的克隆、表达模式与功能分析[D]. 邹明民.福建农林大学 2015
[8]马铃薯甲虫保幼激素合成与信号转导相关基因的克隆和功能分析[D]. 周立涛.南京农业大学 2013
[9]亚剂量氟铃脲对昆虫免疫的干扰机制及血细胞高通量药物筛选[D]. 贺媛.华东理工大学 2011
[10]吡虫啉对烟粉虱实验种群的亚致死影响[D]. 吴咚咚.福建农林大学 2009
本文编号：3509591
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