成年枇杷叶柄及叶脉培养中防止褐化及愈伤组织诱导的研究

发布时间：2017-05-08 11:11

  本文关键词：成年枇杷叶柄及叶脉培养中防止褐化及愈伤组织诱导的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究以十年生‘大五星’枇杷树的幼嫩叶片为试材,对叶柄及叶脉离体培养中褐化控制、愈伤组织诱导及愈伤组织继代培养进行了研究。研究内容包括：外植体表面灭菌方法、叶龄选择、叶柄及叶脉部位选择、叶片4℃低温处理、MS培养基(大量元素)浓度、抗褐化物质聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、生长调节剂的浓度、暗培养、低温培养、转瓶以及愈伤组织继代培养。主要研究结果如下：1.外植体表面灭菌以75%酒精消毒时间为10s、0.1%升汞消毒时间为8min时,灭菌效果最好。此时叶柄及叶脉污染率和褐化率均较低,分别为14.44%和8.89%,而叶柄及叶脉成活率、愈伤组织诱导率较高,均为76.67%。2.叶龄及部位选择：中度成熟(10d)叶片的叶柄为最理想的材料,成活率、愈伤组织诱导率较高,分别为55.56%、53.33%,且诱导的愈伤组织结构较紧密,淡绿色,生理状态较好。3.最佳抗褐化处理：以在1/8MS培养基,PVP1.5mg/L,接种前不经过4℃低温处理的组合下,褐化率最低,为11.11%,存活率和愈伤组织发生率最高,分别为80.00%、77.78%。4.枇杷叶柄及叶脉初代培养的最佳配方为：MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 1.5 mg/L+ NAA0.4mg/L,在此配方中叶柄及叶脉褐化率较低,为17.78%,存活率和愈伤组织发生率最高,均为72.22%。5.外植体最佳的培养条件及转瓶时间为：外植体接种后在20℃温度下培养,暗培养两周,5d转瓶一次,其褐化率最低,存活率和愈伤组织发生率最高,分别为15.74%、75.82%、69.93%。6.愈伤组织最佳的继代培养配方为：MS(1/2N)+TDZ1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+ AgNO3 0.2mg/L,在此培养基中愈伤组织颗粒大小居中,表面局部突起最多,结构较致密,深绿色,表面有少量白色颗粒,无褐化。
【关键词】：枇杷 叶脉及叶柄 褐化
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S667.3
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 缩略词7-10
• 前言10
• 1 文献综述10-17
• 1.1 枇杷组织培养研究概况10
• 1.2 枇杷叶片、叶柄及叶脉组织培养概况10-11
• 1.3 叶片离体再生的研究概况11
• 1.3.1 基本培养基11
• 1.3.2 生长调节剂11
• 1.4 组织培养中的褐化问题及防治措施11-17
• 1.4.1 褐化现象及机理11-12
• 1.4.1.1 褐化现象11-12
• 1.4.1.2 褐化机理12
• 1.4.2 影响褐化的因素12-15
• 1.4.2.1 基因型12-13
• 1.4.2.2 外植体的生理状态13-14
• 1.4.2.3 培养基14
• 1.4.2.4 培养条件14-15
• 1.4.2.5 防褐剂15
• 1.4.3 防止褐化的措施15-17
• 1.4.3.1 母株及外植体预处理15
• 1.4.3.2 选择适宜的培养基及培养条件15-16
• 1.4.3.3 培养基中加入防褐化物质16-17
• 1.4.3.4 连续转移外植体17
• 2 本研究的目的及意义17
• 3 材料与方法17-25
• 3.1 供试材料17-18
• 3.2 方法18-25
• 3.2.1 外植体表面灭菌处理18
• 3.2.2 接种18
• 3.2.3 酒精和升汞组合最佳灭菌时间的筛选18-19
• 3.2.4 叶片成熟度及叶柄、叶脉部位对褐化及愈伤组织诱导的影响19-20
• 3.2.5 褐化防止20-21
• 3.2.6 生长调节剂及浓度组合对褐化及愈伤组织诱导的影响21-23
• 3.2.7 接种后的培养温度、暗培养时间及转瓶时间对褐化及愈伤组织诱导的影响23-24
• 3.2.8 叶柄及叶脉愈伤组织的继代培养24-25
• 3.3 培养条件25
• 3.4 数据统计与分析25
• 4 结果与分析25-34
• 4.1 酒精和升汞组合最佳灭菌时间对褐化及愈伤组织诱导的影响25-27
• 4.2 叶片成熟度及叶柄、叶脉不同部位对褐化及愈伤组织诱导的影响27-28
• 4.3 不同的防褐化条件对褐化及愈伤组织诱导的影响28-30
• 4.4 生长调节剂及浓度组合对褐化及愈伤组织诱导的影响30-31
• 4.5 接种后的培养温度、暗培养时间及转瓶时间对褐化及愈伤组织诱导的影响31-32
• 4.6 MS培养基中NH_4~+的浓度、TDZ、NAA及AgNO_3对愈伤组织继代培养的影响32-34
• 5 讨论34-36
• 5.1 酒精和升汞组合最佳灭菌时间对褐化及愈伤组织诱导的影响34
• 5.2 叶片成熟度及叶柄、叶脉不同部位对褐化及愈伤组织诱导的影响34-35
• 5.3 不同的防褐化条件对褐化及愈伤组织诱导的影响35
• 5.4 生长调节剂及浓度组合对褐化及愈伤组织诱导的影响35
• 5.5 接种后的培养温度、暗培养时间及转瓶时间对褐化及愈伤组织诱导的影响35-36
• 5.6 MS培养基中NH_4~+的浓度、TDZ、NAA及AgNO_3对愈伤组织继代培养的影响36
• 6 下一步工作建议36-38
• 参考文献38-44
• 致谢44

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