番木瓜炭疽病拮抗菌鉴定、抗菌成分分析及作用机理研究

发布时间：2017-06-24 03:04

  本文关键词：番木瓜炭疽病拮抗菌鉴定、抗菌成分分析及作用机理研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：番木瓜是一种很有发展前景的热带亚热带水果,然而,贮运期间番木瓜果实易腐,易受到多种病原微生物的侵染而引起采后腐烂,造成经济损失,其中,胶孢炭疽菌(Collectotrichum gloeosporioides Pei忆)是引起番木瓜采后炭疽病的主要病原菌。生物防治作为一种对人类和环境安全的防治方法受到关注和重视,但是我国对番木瓜炭疽病的生物防治研究并不多,有效地拮抗菌资源还有限,限制着果蔬采后病害生物防治技术的发展。本研究从番木瓜果实表皮组织筛选对番木瓜炭疽病有较好防治效果的拮抗菌,鉴定获取的拮抗菌株并其对产生的抗菌物质和防治作用机理进行初步研究。 通过研究得到以下结论：1、从番木瓜果实表皮组织筛选到451株菌株,以番木瓜炭疽病菌为靶标菌,经过初筛、复筛,获得有较强拮抗作用菌株20株,其中1w320菌株对番木瓜炭疽病菌(C. gloeosporioides)抑制作用最强。平板对峙试验表明,菌株1w320对14种病原真菌的拮抗指数均在1.42以上,对番木瓜炭疽病菌(C. gloeosporioides)的拮抗指数达到2.90。通过对菌株在培养基上的形态描述,显微观察,生理生化测定并结合16S rDNA序列分析,将1w320鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。采后防治试验表明,1w320菌株对采后番木瓜炭疽病的防治效果达到76.5%。2、采用牛津杯法进行体外抑菌试验中,菌株1w320的发酵滤液能在平板上产生一个约20mm的抑菌圈。菌株1w320及其发酵液产生的挥发性物质对番木瓜炭疽病菌(C. gloeosporioides)都有较好的抑制作用。生理生化试验表明,菌株1w320发酵滤液中抗菌物质对温度、pH、蛋白酶K以及金属离子具有很好的稳定性和耐受性,在果蔬生物防治方面具有重大的应用潜力。解淀粉芽孢杆菌1w320所产生的挥发性活性物质组分属于烷烃,酚类,酸,酯等几类物质。3、体外拮抗试验表明,抑菌带周边的病原菌菌丝颜色逐渐加深变黑,菌株1w320产生的抗菌物质能抑制炭疽菌丝生长,并使菌丝顶端畸变缢缩、膨大,甚至细胞壁破裂流出原生质体。番木瓜炭疽病菌分生孢子多数不能够正常萌发产生芽管,最终引起孢子破裂,释放内含物。接种试验表明,菌株1w320在一定程度上提高了过氧化物酶、多酚氧化酶的活性,有效控制了番木瓜炭疽病情扩展。研究还发现番木瓜果实经菌株1w320处理后,能够抑制住果实颜色转黄,减缓了果实硬度的减小及可溶性固形物的升高。
【关键词】：番木瓜 炭疽病 拮抗细菌 抗菌物质 生防作用
【学位授予单位】：海南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S436.67
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 上篇文献综述10-22
• 第一章 番木瓜采后炭疽病发生、危害与防治10-15
• 1 番木瓜生产现状10
• 2 番木瓜采后炭疽病的危害10-12
• 3 生物防治的定义12-15
• 3.1 利用拮抗微生物的拮抗作用来控制病原菌12-13
• 3.2 通过诱导果实抗性来抵抗病原菌的侵染13
• 3.3 利用动植物源具抗菌活性的天然物质13-14
• 3.4 对拮抗微生物进行遗传改良14-15
• 第二章 拮抗微生物的应用现状15-18
• 1 微生物资源成为新药开发的重要原材料15
• 2 微生物抑菌活性成分分析15-16
• 3 拮抗菌解淀粉芽孢杆菌研究进展16-18
• 第三章 拮抗菌进行生物防治的作用机理18-21
• 1 产生能抑制病原菌生长的抗菌素类物质18-19
• 2 通过快速生长繁殖在寄主伤口处实现有效的营养和空间竞争19
• 3 与病原菌产生吸附作用直接抑制病原菌生长19-20
• 4 诱导寄主产生抗性20-21
• 第四章 研究目的和意义21-22
• 下篇研究内容22-48
• 第一章 番木瓜炭疽病拮抗菌的筛选及鉴定22-30
• 1 引言22
• 2 材料与方法22-25
• 2.1 材料22-23
• 2.1.1 供试果实22-23
• 2.1.2 供试菌株23
• 2.1.3 主要仪器23
• 2.2 方法23-25
• 2.2.1 拮抗细菌的分离23
• 2.2.2 拮抗细菌的初筛23-24
• 2.2.3 拮抗细菌的复筛24
• 2.2.4 抑菌谱测定24
• 2.2.5 菌株1w320生理生化性状测定24
• 2.2.6 菌株1w320的分子鉴定24-25
• 3 结果分析25-28
• 3.1 拮抗细菌的分离筛选25
• 3.2 20拮抗细菌的抑菌活性测定25
• 3.3 抑菌谱测定25-27
• 3.4 菌株1w320的生理生化特征27
• 3.5 菌株16S rDNA序列分析27-28
• 3.6 菌株1w320的鉴定28
• 4 讨论28-30
• 第二章 拮抗菌株1w320抗菌成分初步分析30-39
• 1 引言30-31
• 2 材料与方法31-33
• 2.1 供试材料31
• 2.1.1 主要仪器31
• 2.1.2 供试试剂31
• 2.1.3 供试菌株31
• 2.2 方法31-33
• 2.2.1 菌株1w320发酵滤液对番木瓜炭疽菌的抑制作用31-32
• 2.2.2 菌株1w320发酵滤液的稳定性32
• 2.2.2.1 温度对活性物质抑菌活性的影响32
• 2.2.2.2 pH对活性物质抑菌活性的影响32
• 2.2.2.3 蛋白酶K处理对活性物质抑菌活性的影响32
• 2.2.2.4 金属离子对活性物质抑菌活性的影响32
• 2.2.3 菌株1w320抗菌物质粗提物的提取32
• 2.2.4 菌株1w320挥发性物质对番木瓜炭疽病菌的抑制作用32-33
• 2.2.5 菌株1w320挥发性物质的GC-MS分析33
• 2.2.6 菌株1w320对番木瓜采后炭疽病防治作用33
• 3 结果分析33-38
• 3.1 菌株1w320发酵滤液对番木瓜炭疽菌的抑制作用33-36
• 3.1.1 温度对活性物质抑菌活性的影响34
• 3.1.2 pH对活性物质抑菌活性的影响34-35
• 3.1.3 蛋白酶K对活性物质抑菌活性的影响35
• 3.1.4 金属离子对活性物质抑菌活性的影响35-36
• 3.3 菌株1w320挥发性物质对番木瓜炭疽病菌的抑制作用36
• 3.4 菌株1w320挥发性物质的GC-MS分析36-37
• 3.5 菌株1w320对番木瓜采后炭疽病防治作用37-38
• 4 讨论38-39
• 第三章 菌株1w320防治番木瓜炭疽病作用机理初步研究39-48
• 1 引言39-40
• 2 材料与方法40-42
• 2.1 材料40
• 2.1.1 供试水果40
• 2.1.2 供试菌株40
• 2.1.3 主要仪器40
• 2.2 菌株1w320对番木瓜炭疽病菌菌丝及孢子的影响40-41
• 2.3 番木瓜果实经菌株1w320处理后果皮防御酶活性变化41-42
• 2.3.1 番木瓜果实接种处理41
• 2.3.2 防御酶活性测定方法41-42
• 2.3.2.1 过氧化物酶(POD)活性测定41
• 2.3.2.2 多酚氧化酶(PPO)活性测定41-42
• 2.4 菌株1w320对番木瓜果实贮藏品质的影响42
• 2.4.1 果实颜色变化的测定42
• 2.4.2 果实硬度的变化42
• 2.4.3 果实可溶性固形物(SSC)的测定42
• 2.5 统计分析42
• 3 结果分析42-46
• 3.1 菌株1w320对番木瓜炭疽菌菌丝及孢子的影响42-43
• 3.2 过氧化物酶(POD)活性测定43-44
• 3.3 多酚氧化酶(PPO)活性测定44
• 3.4 菌株1w320对番木瓜果实贮藏品质的影响44-46
• 3.4.1 果实颜色变化的测定44-45
• 3.4.2 果实硬度和可溶性固形物(SSC)的变化45-46
• 4 讨论46-48
• 结论48-49
• 参考文献49-57
• 致谢57

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