农产品玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用

发布时间：2017-06-28 02:06

  本文关键词：农产品玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：玉米赤酶醇来自于玉米,花生,小麦,大米等产生的玉米赤霉醇菌在不规范的储存时产生的次生代谢产物为玉米赤霉烯酮的还原产物,商品名字“畜大壮”又名“右环十四酮酚”,这种还原产物属于雷索酸内酯类非甾体类同化激素的物质,有较强的促进生长的作用。玉米赤酶醇是一种效果比较好的促进动物生长的激素类物质,属于非固醇非激素类化合物于一类的物质。玉米赤霉醇具有促进蛋白质合成和提高蛋白质效率的作用所以在欧美等发达国家被广泛使用,我国也是在二十世纪末期开始在中国示范。后来经过大量的实验工作和数据,证明玉米赤霉醇在哺乳动物体内有蓄积,并且对动物和人都具有一定的危害性。所以发达国家就明确禁止将玉米赤霉醇等激素类药物用于养殖我国农业部在第193号公告明确规定玉米赤霉醇于等对人体有害的抗生素类药物也禁用于所有食源性动物,同时还规定了在可食动物的组织和尿液中不得检出。而目前的检测方法主要有液相,质谱和串联质谱等方法,但是这些方法都比较繁琐,时间比较长,对操作人员技术要求非常高,所以酶联免疫的方法更容易被大众接收,因为玉米赤霉醇酶联免疫的方法比较简单,实用性比较强,特异性较好,对操作人员的技术要求不高。更容易被基层的检测部门接受,一般的饲料公司等也能使用。1.目的：建立快速、有效比较经济的玉米赤霉醇检测试剂盒用于检测植物性食品中ZER的残留量。2.方法：应用间接竞争ELISA法,这种方法是采用抗原与抗体的特异反应的原理,将需要检测物质和酶通过生物的方法连接就起来,最后通过酶与底物产生颜色的不同来定量测定看待检测的物质的含量。测定的对象可以是抗体也可以是抗原建立玉米赤霉醇单克隆抗体快速检测植物性食品中ZER含量的定性或者是半定量检测。同时对该ELISA试剂盒进行了包被,固定,吹干等一系列的调试,使得玉米赤霉醇试剂盒的反应更加灵敏,特异性更强。3.结果：实验以人工合成的ZER为包被原,ZER为竞争半抗原,两者与一定量的抗玉米赤霉醇单克隆抗体反应,建立检测ZER的ELISA方法。当包被浓度为1：5000时是最理想的包被浓度比例,当单抗和酶标二抗稀释倍数调节到1：500和1：2500时,试剂盒的显色效果最为理想。然而当样品溶液与单抗溶液体积比50：50时酶联效果最为理想,底物溶液的选择中等浓度底物显色液,单抗反应时间的确定60min,抗体最适工作浓度为1：5000,酶标二抗的最适工作浓度为1：5000。而当所研制的试剂盒检测限控制在0.5ng/mL时,添加回收率在60.0%-120.0%之间,变异系数小于20%,在2-8℃条件下可保存3个月。
【关键词】：玉米赤霉醇 单克隆抗体 间接竞争 检测限 ELISA
【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S133
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 1. 前言10-15
• 2. 材料与方法15-17
• 2.1 材料15
• 2.2 玉米赤霉醇试剂盒研制的方法15-17
• 3. 结果与分析17-33
• 3.1 最适包被浓度的确定17-18
• 3.2 最适单抗和酶标二抗稀释倍数的确定18-19
• 3.3 样品溶液与单抗溶液体积比例的确定19
• 3.4 包被液的确定19-20
• 3.5 玉米赤霉醇试剂盒的封闭液实验20
• 3.6 酶标二抗稀释液的确定20-21
• 3.7 单抗稀释液的确定21-22
• 3.8 底物显色液的确定22-23
• 3.9 包被液、封闭液、抗体稀释液、酶标二抗稀释液、底物显色液的综合试验23
• 3.10 包被条件的确定23-24
• 3.11 封闭时间的确定24-25
• 3.12 单抗反应时间的确定25
• 3.13 酶标二抗反应时间的确定25-26
• 3.14 底物显色条件的确定26-27
• 3.15 试剂盒灵敏度的确定27-28
• 3.16 试剂盒特异性的测定28-29
• 3.17 玉米赤霉醇试剂盒精密度的测定29
• 3.18 试剂盒准确度的测定29-30
• 3.19 试剂盒老化试验30-31
• 3.20 不同批次试剂盒2～8℃保存期试验31-33
• 4. 讨论33-34
• 4.1 空白牛尿的实际测得值意义33
• 4.2 玉米赤霉醇检测试剂盒回收率的计算33
• 4.3 ELISA检测试剂盒的特异性、灵敏度33
• 4.4 ELSA检测试剂盒的保存时间33-34
• 5 结论34-35
• 参考文献35-40
• 附录40-42
• 致谢42-43
• 作者简历及论文发表43

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 马康;董静;邢金京;;液相色谱串联质谱测定α-玉米赤霉醇标准物质中的杂质[J];化学通报;2010年10期

2 K.D.Greathead ,邱昌庆;玉米赤霉醇对断奶前肉用犊牛生长及肥育的效果[J];国外畜牧学(草食家畜);1985年05期

3 ;玉米赤霉醇能成倍延长母羊发情期[J];四川畜禽;1996年09期

4 刘凯;郝利忠;陈玉艳;张天姝;王丽娜;;饲料中玉米赤霉醇类药物的测定—超高效液相色谱-串联质谱法[J];现代畜牧兽医;2013年09期

5 王鹤佳,史为民,沈建忠,唐宁,王平;牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究[J];中国兽医杂志;2004年11期

6 张伟;王建平;沈建忠;李晓薇;;牛肉组织中玉米赤霉醇及相关物残留的气相色谱-质谱法测定[J];畜牧兽医学报;2007年05期

7 ;玉米赤霉醇[J];质量探索;2013年Z1期

8 傅永福;宋经元;孟繁静;;肉牛体内玉米赤霉醇残留量的检测(简报)[J];北京农业大学学报;1991年01期

9 柏长青;牛羊增肉剂“玉米赤霉醇”[J];北京农业;1995年02期

10 张殿申,刘富龙,解自富,孙士卿;埋植牛羊增重剂──玉米赤霉醇的效果观察[J];山东畜牧兽医;1997年02期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 张晓东;朱叶青;朱惠珍;;LC-MS/MS法测定牛肉中玉米赤霉醇的残留[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年

2 马康;董静;邢金京;;离子阱-飞行时间/串联质谱仪(HPLC-IT-TOF)测定α-玉米赤霉醇中的杂质[A];全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集[C];2010年

3 曹莹;黄士新;王蓓;孙亚云;王迪楼;;LC-MS法分析鸡肝中的玉米赤霉醇[A];2004年全国有机质谱学术交流会论文集[C];2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王东;农产品玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用[D];湖南农业大学;2015年

2 游丽娜;动物源食品中6种玉米赤霉醇类化合物残留量测定[D];重庆医科大学;2013年

3 王鹤佳;牛尿中玉米赤霉醇残留酶联免疫检测方法的研究[D];中国农业大学;2004年

4 李少春;植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用[D];河北大学;2010年

5 邹斌;α-玉米赤霉醇影响小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化[D];广西医科大学;2014年

6 刘媛;玉米赤霉醇和米尔比菌素肟化物免疫学检测技术研究[D];南京师范大学;2005年

7 刘婷婷;玉米赤霉醇与啶虫脒残留动态变化规律及去除方法的研究[D];南京农业大学;2009年

8 高文;α-玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞作用的研究[D];河北大学;2011年

9 郝华超;α-玉米赤霉醇对大鼠成骨细胞分泌IL-6的影响及其机制的初步研究[D];河北大学;2014年

10 张清杰;IAC-LC法检测食品中氯霉素、玉米赤霉醇类兽药残留量[D];南华大学;2013年

  本文关键词：农产品玉米赤霉醇ELISA检测试剂盒的研制与应用，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：492071