鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体的制备

发布时间：2018-03-10 11:13

  本文选题：鸡　切入点：p　出处：《中国兽医科学》2017年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离。切胶研磨,将收集的鸡p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,选取抗体阳性的小鼠脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合并筛选单抗。结果显示,经亚克隆纯化,共筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6。利用间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹检测单抗效价。成功制备了特异性鸡p21单抗。这为进一步研究鸡p21生物学功能奠定了基础。
[Abstract]:In order to prepare a specific monoclonal antibody against cyclin dependent kinase inhibitor p21 (p21), chicken p21 gene was amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and cloned into prokaryotic expression vector pET-30a. The expression was induced by isopropylthiogalactoside (IPTG) and separated by SDS- polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The collected chicken p21 protein was intraperitoneally immunized with BALB/c mice. The antibody positive mouse spleen was fused with mouse myeloma cell line SP2/0 and monoclonal antibody was screened. The results showed that 12 positive hybridoma cell lines were obtained by subclone purification. The specific monoclonal antibody p21 was successfully prepared by using indirect immunofluorescence (IFA), enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) and immunoblotting assay (Elisa) to study the biological function of chicken p21. The results showed that the specific monoclonal antibody of chicken p21 was prepared successfully by 1B12C, 1E12, 1H7, 2C5, 2C8, 2D8, 2F2, 3C11, 3D6, 3G7 and 4G6.The titer of specific monoclonal antibody against p21 was successfully prepared by indirect immunofluorescence (IFA), enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) and immunoblotting assay.
【作者单位】： 南京农业大学动物医学院;中国农业科学院上海兽医研究所;
【基金】：国家自然基金面上项目(31472218) 江苏省自然科学青年基金项目(BK20140711) 留学回国人员科研启动基金项目(教外司留[2014]1685号) 中央高校基本业务费(Y0201300526,Y0201300527) 江苏省优势学科专项经费
【分类号】：S831

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