“复方柴芩颗粒”对黄曲霉毒素B1慢性中毒肉鸭CYP450酶的影响及其部分药理作用

发布时间：2017-03-23 00:16

  本文关键词：“复方柴芩颗粒”对黄曲霉毒素B1慢性中毒肉鸭CYP450酶的影响及其部分药理作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本试验主要观察“复方柴芩颗粒”对AFB1 (Aflatoxin B1,简写AFB1)引起的肉鸭肝损伤的部分药理作用,并从分子水平上探讨“复方柴芩颗粒”对AFB1慢性中毒时细胞色素P450酶的活性和mRNA及蛋白表达的影响。主要试验内容及结果如下：试验方法健康1日龄樱桃谷肉鸭126只,饲喂试验基础日粮6天,于第7天(肉鸭7日龄)时,随机选取21只肉鸭作为正常组,继续饲喂实验基础日粮。其余105只肉鸭,每天饲喂含40μg/kg AFB1的饲料,建立肉鸭AFB1慢性中毒模型,同时分为模型组、阳性对照组、“复方柴芩颗粒”高剂量组、“复方柴芩颗粒”中剂量组、“复方柴芩颗粒”低剂量组,每组21只。本试验共六组,造模和用药同时进行,选取造模(用药)7 d、14 d和21 d为3个时间点,六个组每组分别随机选取7只肉鸭,取血和肝脏。检测血清氧化应激指标(SOD、MDA)、肝脏损伤标志性指标(AKP、GOT、GPT)、观察肝脏组织的病理变化。取2g肝组织制备肝微粒体,检测肝微粒体中CYP3A4、 CYP1A2和CYP2E1活性以及肝标本中CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1蛋白表达水平。取黄豆粒大小的肝组织,用于检测CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1 mRNA表达量。试验结果结果显示,同模型组相比,用药三个时间点“复方柴芩颗粒”高、中、低剂量组,血清中丙二醛(MDA)含量、碱性磷酸酶(AKP)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活力显著降低(P0.05);超氧化物歧化酶(SOD)显著升高(P0.05)；肝组织空泡化降低、胆管增生现象较轻。综合考虑投药14d,各项指标更接近正值。与模型组相比,“复方柴芩颗粒”三个治疗组用药7d和14 d,肝脏微粒体细胞色素P450酶系CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1活性显著降低(P0.05)；用药21d“复方柴芩颗粒”三个治疗组CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1活性升高(P0.05),但与模型组相比差异不明显。与模型组相比,“复方柴芩颗粒”三个治疗组用药7d、14d和21d,肝脏CYP3A4、 CYP1A2和CYP2E1 mRNA相对表达量显著降低(P0.05)。与模型组相比,“复方柴芩颗粒”三个治疗组用药7 d、14 d和21d,CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1蛋白表达量显著降低(P0.05)。用药7d和14d CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1 mRNA相对表达量和蛋白表达量明显低于用药21d的表达量(P0.05),且低剂量组数据显著高于高、中剂量组(P0.05)。试验结论：1.“复方柴芩颗粒”能有效的防治肉鸭AFB1慢性中毒,主要通过调节肉鸭的抗氧化功能、提升肝功能来实现的。且投药14 d药效最好。所以综合考虑,优选出最佳用药方案,即低剂量用药14d。2.用药7、14d,“复方柴芩颗粒”能有效抑制由AFB]导致的CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1活性升高的趋势,减少AFB1前体物质代谢激活,降低其化学性肝脏损伤达到保护肝脏的作用。用药21d CYP450活性升高,可能与“复方柴芩颗粒”本身具有升高CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1活性的作用,但其诱导效果远远低于AFB1,且只是随着时间推移逐渐显现出来有关。3.“复方柴芩颗粒”能有效抑制由AFB1引起的CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1 mRNA相对表达量和蛋白表达量升高的趋势,从而减少AFB1前体物质代谢激活,降低AFB1引起的化学性肝脏损伤,进而达到保护肝脏的作用。但随用药时间增加,治疗组三种基因型表达量逐渐升高,进而证明“复方柴芩颗粒”本身很有可能具有一定的诱导CYP3A4、CYP1A2和CYP2E1的作用,但其诱导效果只是随着时间推移逐渐显现出来。
【关键词】：细胞色素P4503A4酶 细胞色素P450 1A2酶 细胞色素P450 3A4酶 复方柴芩颗粒 黄曲霉毒素B1 肝损伤 肉鸭
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.32
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 常用符号及缩略语说明9-14
• 第一部分 选题背景与文献综述14-25
• 第一章 选题背景及研究目的14-16
• 1. 选题背景14
• 2. 研究目的与意义14-16
• 第二章 文献综述16-25
• 1. 黄曲霉毒素研究概述16-17
• 1.1 黄曲霉素简介16
• 1.2 黄曲霉毒素的肝毒性及毒性机制16-17
• 1.3 生产中缓解黄曲霉素对动物毒性的方法17
• 2. CYP450研究概述17-20
• 2.1 药物代谢酶简介17-18
• 2.2 CYP450简介18
• 2.3 CYP450命名18-19
• 2.4 CYP450作用19
• 2.5 研究较多的CYP450类型19-20
• 3. AFB1对CYP450影响20
• 4. 中药对CYP450影响研究20-25
• 4.1 中药有效成分黄酮类化合物对CYP450影响21
• 4.2 中药有效成分萜类化合物对CYP450影响21
• 4.3 中药有效成分呋喃香豆素类化合物对CYP450影响21-22
• 4.4 中药有效成分多糖类化合物对CYP450影响22
• 4.5 中药有效成分生物碱类化合物对CYP450影响22-23
• 4.6 中药提取物对CYP450影响23
• 4.7 中药有效成分酚类物质对CYP450影响23
• 4.8 中药配伍对CYP450的影响23-25
• 第二部分 试验研究25-53
• 第一章 “复方柴芩颗粒”对防治鸭黄曲霉毒素B1慢性中毒部分药理作用研究25-38
• 1. 试验材料25-26
• 1.1 主要药品与试剂25
• 1.2 试验动物25
• 1.3 仪器25-26
• 2. 试验方法26-32
• 2.1 AFB1慢性中毒模型建立26
• 2.2 试验动物分组及饲养管理26-27
• 2.3 样品采集处理27
• 2.4 肉鸭抗氧化应激能力检测27-28
• 2.5 肝脏损伤的三个标志性指标检测28-30
• 2.6 肝组织病理组织学观察30-31
• 2.7 实验基础日粮中AFB1的含量检测31-32
• 2.8 统计学分析32
• 3. 试验结果32-35
• 3.1 各组抗氧化应激指标32-33
• 3.2 肝脏损伤的三个标志性指标检测结果33-34
• 3.3 肝组织病理学变化34-35
• 3.4 基础日粮中AFB1含量35
• 4. 讨论35-38
• 4.1 “复方柴芩颗粒”对肝损三个标志性指标的影响35-36
• 4.2 “复方柴芩颗粒”对抗氧化应激指标的影响36
• 4.3 “复方柴芩颗粒”对肝脏病理变化的影响36-38
• 第二章 “复方柴芩颗粒”对鸭AFB1慢性中毒CYP450酶活性的影响38-44
• 1. 试验材料38
• 1.1 主要药品与试剂38
• 1.2 试验动物分组及饲养管理38
• 1.3 仪器38
• 2. 试验方法38-40
• 2.1 收集实验材料38
• 2.2 肉鸭肝微粒体制备38-39
• 2.3 CYP3A4、CYP1A2及CYP2E1活性检测39-40
• 2.4 统计学分析40
• 3. 试验结果40-41
• 3.1 “复方柴芩颗粒”对AFB1慢性中毒鸭CYP3A4活性的影响40
• 3.2 “复方柴芩颗粒”对慢性中毒鸭AFB1CYP1A2活性40-41
• 3.3 “复方柴芩颗粒”对AFB1慢性中毒鸭CYP2E1活性41
• 4. 讨论41-44
• 第三章 “复方柴芩颗粒”对鸭AFB1慢性中毒CYP450酶表达的影响44-53
• 1. 试验材料44-45
• 1.1 主要药品与试剂44
• 1.2 试验动物分组及饲养管理44
• 1.3 仪器44-45
• 2. 试验方法45-47
• 2.1 样品的收集和处理45
• 2.2 CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1定量RT-PCR分析45-46
• 2.3 CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1免疫蛋白印迹分析46-47
• 2.4 统计学分析47
• 3. 试验结果47-51
• 3.1 实时荧光定量PCR结果47-48
• 2.2 Western-blot结果48-51
• 4. 讨论51-53
• 第三部分 结论、创新与建议53-55
• 1. 本研究主要结论53
• 2. 本研究创新点53
• 3. 建议53-55
• 参考文献55-65
• 致谢65-66
• 附图66-70
• 攻读学位期间发表的论文目录70

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  本文关键词：“复方柴芩颗粒”对黄曲霉毒素B1慢性中毒肉鸭CYP450酶的影响及其部分药理作用，，由笔耕文化传播整理发布。

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