E种肠道病毒HY12小鼠感染模型及感染小鼠抗体消长规律

发布时间：2017-04-02 07:13

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【摘要】：牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)感染是近年来国内新发的一种以呼吸道和消化道症状为主要特征的传染病,给养牛业造成了严重的经济损失。根据国际病毒分类委员会(ICTV)最新分类,牛肠道病毒分为E和F两个种。肠道病毒感染牛可使其呈现呼吸道和消化道症状,包括发热、咳嗽、呼吸困难、腹泻、脱水,甚至死亡。由于该病在国内为新发疫病,缺乏有关本病诊断、病毒的致病机理等方面的研究。本研究应用所分离的E种肠道病毒HY12,以不同感染途径、感染剂量实验感染不同品系的小鼠,建立病毒感染小鼠模型。将病毒接种不同品系小鼠,确定了HY12病毒对3日龄ICR乳鼠易感。应用PCR和病毒分离技术,确定了实验感染小鼠的带毒、排毒时间可长达18天。以不同剂量的HY12病毒接种3日龄ICR乳鼠,发现病毒感染小鼠的最低剂量为2×106 TCID50。应用滴鼻、消化道灌服、腹腔注射、皮下注射和肌肉注射途径接种HY12病毒,以RT-PCR、病理组织学及免疫组织化学等技术进行观察、检测,发现不同途径接种病毒均可导致小鼠感染。通过病理组织学观察发现,感染小鼠的小肠、肺脏、肝脏、脑、肾脏均出现程度不同的细胞病变及炎性细胞浸润。免疫组织化学检测结果揭示,感染小鼠的大部分组织中可检测到HY12病毒抗原,且主要分布在小肠、肺脏和脑组织。该发现为HY12病毒的致病机制及病毒在宿主体内的带毒时间以及免疫学等方面研究打下基础。本研究进一步确定病毒实验感染的小鼠抗体消长规律。应用表达纯化的HY12重组VP2蛋白作为包被抗原,建立了检测HY12感染小鼠血清抗体的间接ELISA方法,并对各步的条件进行了优化,同时与中和实验进行比较分析,表明建立的检测BEV抗体方法具有很高的特异性、敏感性。重复性实验结果显示,板内阳性血清和阴性血清样品变异系数分别为3.8%和5.2%;板间阳性和阴性样品检测百分率变异系数分别为4%和4.3%,表明建立的检测E种肠道病毒抗体的间接ELISA具有良好的重复性。应用建立的方法检测了HY12感染小鼠的抗体消长规律,确定了小鼠感染病毒后一周开始产生抗体,感染至6周时,抗体水平达到最高,随后逐渐降低。本研究为E种肠道病毒感染的诊断和血清流行病学研究提供了特异、敏感和快速的抗体检测方法。综上所述,本研究建立了HY12病毒感染的小鼠模型,确定了病毒感染小鼠的病毒体内分布及带毒、排毒时间,建立了检测E种肠道病毒抗体的间接ELISA方法及确定了小鼠感染病毒的抗体消长规律。该结果将为E种肠道病毒的致病机理与病毒感染诱导的免疫机理及其疫苗研制、牛肠道病毒感染的诊断和血清流行病学研究提供技术手段与理论基础。
【关键词】：HY12 免疫组化 致病机理 ELISA 动物模型 牛肠道病毒 BEV E种肠道病毒
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩写词表10-11
• 引言11-12
• 第一章 文献综述12-22
• 1.1 牛肠道病毒感染及流行病学概况12
• 1.2 牛肠道病毒分类及理化学特性12-13
• 1.3 小RNA病毒科病毒感染动物模型研究现状13-16
• 1.4 小RNA病毒科病毒诊断方法的相关进展16-22
• 第二章 E种肠道病毒HY12感染ICR乳鼠模型的研究22-41
• 2.1 材料22-25
• 2.2 方法25-29
• 2.3 结果29-39
• 2.4 讨论39-40
• 2.5 小结40-41
• 第三章 E种肠道病毒HY12抗体检测方法及病毒感染小鼠抗体消长规律41-51
• 3.1 材料41-42
• 3.2 方法42-44
• 3.3 结果44-49
• 3.4 讨论49-50
• 3.5 小结50-51
• 结论51-52
• 参考文献52-61
• 导师简介61-63
• 作者简介63-64
• 攻读学位期间发表的学术论文64-65
• 致谢65

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本文编号：282088