动物性食品源沙门氏菌对抗生素和消毒剂的耐药性研究

发布时间：2020-10-28 17:32

　　 沙门氏菌(Salmonella)是国际公认的食品卫生和耐药性监测重要的指示菌,广泛存在自然界,可以通过食物链传播,并感染人和动物,导致腹泻,感染致病性较强的血清型时还能致命。抗生素是预防和治疗沙门氏菌等病原菌感染的重要手段,近年来由于抗生素的广泛及不合理使用,食源性沙门氏菌对抗生素耐药性增强。为了降低传染的发生、阻止抗生素耐药菌的进一步危害,环境消毒控制成为控制病原菌传播的主要措施,目前,季铵盐类(Quaternary Ammonium Compounds, QACs)消毒剂已被广泛用于养殖、食品加工等环境的消毒,然而消毒剂使用的增多是否会导致细菌对消毒剂的耐药也成为众多学者关心的问题,已有报道发现抗生素可以与季铵盐类消毒剂共同耐药,但目前国内关于动物性食品源沙门氏菌对消毒剂耐药及与抗生素共同耐药的研究报道较少。本研究采集四川省肉类样品,分离沙门氏菌,并利用形态学、生理生化及特异基因进行鉴定。按照CLSI推荐方法及判断标准,应用琼脂稀释法测定沙门氏菌对9种不同抗生素、两种季铵盐类消毒剂的MIC值,并应用PCR方法检测抗生素及消毒剂耐药基因,分析沙门氏菌对消毒剂耐药性与抗生素耐药性之间的关系,并对沙门氏菌株进行PFGE分型。本研究主要开展了以下研究：(1)动物性食品源沙门氏菌的分离、鉴定2013-2014年从四川省不同地区采集肉类样品327份包括：猪肉137份,鸡肉91份,牛肉99份,利用选择性培养基分离,invA基因检测,鉴定出沙门氏菌163株(49.84%)：猪肉78株(56.93%),鸡肉46株(50.55%),牛肉39株(39.39%)。沙门氏菌血清型最多的是德尔卑沙门氏菌(Salmonella Derby),鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium),罗森沙门氏菌(S. Rissen),分别占分离菌株数的28.22%,14.11%及11.66%。(2)动物性食品源沙门氏菌对抗生素的耐药性154株(94.48%)沙门氏菌对9种抗生素表现出不同程度的耐药性,对土霉素和甲氧苄啶的耐药率最高。多重耐药分析结果显示,163株沙门氏菌中,71株(43.56%)为多重耐药菌株,多重耐药严重。各种耐药谱型中,1-2耐菌株所占比例最大,其次为3耐,优势耐药谱型分别为OTC-TMP和TMP。(3)动物性食品源性沙门氏菌对消毒剂的耐药性163株沙门氏菌对两种季铵盐消毒剂的MIC值较高,PCR扩增5种季铵盐类质粒型消毒剂耐药基因,分析其与沙门氏菌抗生素耐药性之间的关系。结果表明各消毒剂MIC范围是：BC,8-128 mg/L;CTPC,8-256 mg/L。QACs耐药基因检出率为:qacEΔ1(10.42%;17/163),qacF(17.17%;28/163),未检出gacE、gacG、 sugE(p)。所有抗生素耐药菌中qacEΔ1、qacF检出率高于抗生素敏感菌(p0.05)。(4)动物性食品源沙门氏菌PFGE分型对163株沙门氏菌进行PFGE分型。结果表明沙门氏菌可以分为41个基因型,沙门氏菌污染与肉类采集地点相关,部分同源性较高的沙门氏菌菌株中,抗生素耐药谱型相似。部分菌株消毒剂耐药基因与PFGE谱型相关。本研究发现四川省动物性食品源沙门氏菌污染情况较严重,菌株对抗生素的耐药率及多重耐药率较高,沙门氏菌对季铵盐类消毒剂具有较高MIC值,消毒剂耐药基因检出率高,消毒剂耐药基因qacEΔ1、qacF与抗生素耐药具有显著相关性。耐药沙门氏菌来源与肉类采集地点相关。可见,应加强对动物性食品源沙门氏菌污染及耐药性监测,并需注重动物性肉类食品销售环节传播与防控。
【学位单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S852.61
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
前言
    1 动物性食品源沙门氏菌污染现状
    2 沙门氏菌对抗生素的耐药性
        2.1 细菌耐药机制
        2.2 沙门氏菌对抗生素的耐药表型
        2.3 沙门氏菌对抗生素的耐药基因型
    3 沙门氏菌对消毒剂耐药性
        3.1 耐药表型
        3.2 耐药基因型
    4 抗生素与消毒剂耐药性的相互联系
    5 食源性细菌的PFGE分型
    6 本研究目的意义
第—章 动物性食品沙门氏菌分离、鉴定
    1 材料
        1.1 培养基及试剂
        1.2 仪器
        1.3 引物
    2 方法
        2.1 样品采集
        2.2 沙门氏菌分离鉴定
        2.3 血清型鉴定
    3 结果
        3.1 动物性食品源沙门氏菌分离率
        3.2 动物性食品源沙门氏菌血清型
    4 讨论
        4.1 动物性食品源沙门氏菌污染情况
        4.2 动物性食品源沙门氏菌血清型流行情况
第二章 沙门氏菌对抗生素耐药性
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培养基及试剂
        1.3 抗生素
        1.4 质控菌株
        1.5 仪器
        1.6 引物
    2 方法
        2.1 药敏实验
            2.1.1 菌悬液制备
            2.1.2 含抗生素平板制备
            2.1.3 接种培养
            2.1.4 观察结果
        2.2 抗生素耐药基因检测
            2.2.1 DNA模板制备
            2.2.2 PCR扩增
    3 结果
        3.1 动物性食品源沙门氏菌对抗生素的耐药表型
            3.1.1 不同血清型沙门氏菌对抗生素耐药性
            3.1.2 猪肉源沙门氏菌抗生素耐药性
            3.1.3 鸡肉肉源沙门氏菌抗生素耐药性
            3.1.4 牛肉源沙门氏菌抗生素耐药性
        3.2 不同动物性食品源沙门氏菌耐药性比较
            3.2.1 不同动物性食品源沙门氏菌耐药率
            3.2.2 不同动物性食品源沙门氏菌多重耐药
        3.3 沙门氏菌抗生素耐药基因流行情况
            3.3.1 不同血清型沙门氏菌耐药基因流行情况
            3.3.2 不同肉源沙门氏菌β-内酰胺类耐药基因流行情况
            3.3.3 不同肉源沙门氏菌四环素类耐药基因流行情况
            3.3.4 不同肉源沙门氏菌喹诺酮类耐药基因流行情况
            3.3.5 不同肉源沙门氏菌磺胺类耐药基因流行情况
            3.3.6 不同肉源沙门氏菌氨基糖苷类耐药基因流行情况
    4 讨论
        4.1 动物食品源沙门氏菌抗生素耐药性
        4.2 动物食品源沙门氏菌抗生素耐药基因流行情况
第三章 动物性食品源沙门氏菌对消毒剂耐药性
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培养基及试剂
        1.3 消毒剂
        1.4 质控菌株
        1.5 仪器
        1.6 引物
    2 方法
        2.1 消毒剂MIC值测定消毒剂MIC的测定
            2.1.1 含消毒剂培养基的制备
            2.1.2 菌悬液的制备
            2.1.3 接种培养
            2.1.4 耐药性判定
        2.2 消毒剂耐药基因检测
            2.2.1 DNA模板制备
            2.2.2 PCR扩增
    3 结果
        3.1 动物性食品源沙门氏菌对消毒剂MIC值
            3.1.1 不同血清型沙门氏菌对消毒剂MIC值
            3.1.2 猪肉源沙门氏菌对消毒剂MIC值
            3.1.3 鸡肉源沙门氏菌对消毒剂MIC值
            3.1.4 牛肉源沙门氏菌对消毒剂MIC值
        3.2 动物性食品源沙门氏菌消毒剂耐药基因流行情况
        3.3 沙门氏菌消毒剂耐药表型与基因型之间的相关性
        3.4 沙门氏菌对抗生素及消毒剂耐药性之间的相关性
    4 讨论
        4.1 沙门氏菌对消毒剂MIC
        4.2 沙门氏菌消毒剂耐药基因流行情况
        4.3 消毒剂耐药性与抗生素耐药性关系
第四章 动物性食品源沙门氏菌PFGE分型
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 培养基及试剂
        1.3 仪器
    2 方法
        2.1 胶块制作
        2.2 裂解细胞
        2.3 胶块清洗
        2.4 DNA酶切
        2.5 制胶及加样
        2.6 电泳、染色、成像
        2.7 数据分析
    3 结果
        3.1 PFGE与食品源沙门氏菌血清型的关系
        3.2 PFGE与食品源沙门氏菌来源关系
        3.3 PFGE与沙门氏菌耐药性关系
            3.3.1 PFGE与抗生素耐药性关系
            3.3.2 PFGE与消毒剂耐药性关系
    4 讨论
结论
展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间获得的成果

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本文编号：2860391