miR-21通过靶向PDCD4调控猪子宫内膜细胞凋亡、迁移的作用机理研究

发布时间：2020-10-30 16:36

　　 胚胎附植是哺乳动物繁殖的一个关键环节,胚胎附植前后,胚胎和母体内部的基因和蛋白的表达都会发生改变,这一过程受很多因子调控。miRNAs作为一类内源性的具有调控功能的因子,对胚胎附植过程具有重要调控作用。然而在猪中关于miRNAs对胚胎附植过程的影响及机制研究报道较少。通过早期研究分析发现miR-21在猪胚胎附植期子宫内膜组织中高表达且差异表达,而以往关于miR-21的报道多集中于肿瘤方面。本文为探究miR-21对猪胚胎附植的影响,以早期妊娠母猪为实验对象,先检测了猪妊娠早期3个时期(9d、12d、15d)及空怀12d天的子宫内膜组织中miR-21的表达量,然后运用双荧光酶报告检测、Annexin V-FITC流式检测、Transwell检测、小鼠子宫角注射、qRT-PCR和Western Blot等实验技术方法探究miR-21及其靶基因PDCD4在猪早期胚胎附植过程中的作用及分子机制。本研究对了解猪胚胎附植的分子调控机制以及养猪业经济效益的提高具有重要意义。主要研究结果如下:1.qRT-PCR技术检测猪妊娠9d、12d、15d及空怀第12d天的子宫内膜组织中miR-21的表达情况,结果表明miR-21在妊娠12d相对表达量最高,且妊娠12d与妊娠9d及空怀第12d表达量差异均显著。2.Annexin V-FITC流式检测结果表明,抑制miR-21的表达,会促进猪子宫内膜细胞凋亡;Transwell检测结果表明,抑制miR-21的表达,会抑制猪子宫内膜细胞迁移。3.生物学信息预测miR-21靶向PDCD4基因,双荧光报告基因验证miR-21能够结合PDCD4 3’UTR抑制报告基因的表达,qRT-PCR和Western Blot结果表明miR-21可以在翻译水平负调控PDCD4的表达。4.Annexin V-FITC流式和Transwell检测结果表明,抑制PDCD4的表达(转染PDCD4 siRNA)能够抑制猪子宫内膜细胞凋亡,促进细胞迁移。补充外源PDCD4siRNA则能够减弱抑制miR-21 inhibitor引起的促进子宫内膜细胞凋亡和回复miR-21 inhibitor引起的抑制细胞迁移作用。5.qRT-PCR检测结果表明,抑制miR-21的表达,会显著下调转化生长因子TGF-β的表达,而抑制PDCD4基因的表达,会显著上调TGF-β基因的表达。6.小鼠活体子宫角注射试验结果表明,注射miR-21的干涉片段后,小鼠胚胎附植数目明显减少。综上所述,下调miR-21后,会直接靶向PDCD4基因促进猪子宫内膜细胞凋亡,抑制细胞迁移;同时抑制胚胎附植标志基因TGF-β的表达。另外下调miR-21,会直接影响小鼠的胚胎着床,不利于胚胎附植。推测miR-21对猪早期胚胎附植可能具有重要作用。
【学位单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S828
【部分图文】：

鼠以及猪等多种哺乳动物中，均有大量研究证实 LIF 基因在妊娠早期胚胎附植中高表达，可以促进滋养层和子宫内膜细胞的增殖、迁移并受到雌激素和孕激调节，此外敲除 LIF 基因的小鼠胚胎只能发育到胚泡期从而导致胚胎附植失(Stewart 1994，Laird et al 1997，Blitek et al 2012b）。此外，表皮生长因子受体（EG和它们的配体家族已被发现在小鼠胚胎附植期子宫子宫的表达模式，结果显EGFR 家族受体与配体的信号传导对胚胎附植极为重要，可以影响囊胚的生长及基质细胞的增殖(Lim et al 1997）。在猪妊娠第 13-14 天胚胎附植前期 EGFR mR和蛋白水平在子宫内膜腔及腺体上皮均强烈表达，促进子宫内膜细胞的迁移(Jet al 2016a），以及 HB-EGF、IL-6、VEGF、BMP2 等基因都被认为对猪胚胎附植有重要作用。它们在子宫胚胎附植期间都强烈表达且与非附植点差异表达(Bliteal 2012c，Chen et al 2015）。对猪早期胚胎附植标志基因的研究，可以帮助我定与胚胎着床相关的候选基因，对于理解基因调控胚胎附植过程的细胞和分子础研究具有重要意义，也可以作为猪产仔数遗传标记研究的资源。

-21 通过靶向 PDCD4 调控猪子宫内膜细胞凋亡、迁移的作用机理研究妊娠早期子宫内膜组织的表达-21 在猪早期胚胎附植过程中的相对表达情况，采9 d、12 d 和 15 d）及空怀 12d 的子宫内膜组织的术检测 miR-21 在猪子宫内膜组织中的相对表达 12d，miR-21 基因的表达量最高，且与空怀 12d在这三个时期，miR-21 的表达量先升高，再降 表达量最高。结果表明 miR-21 在猪胚胎附植早

图 3-2 不同处理后 miR-21 的相对表达量（A）转染 inhibitor（B）转染 mimicsFig 3-2 The miR-21 expression levels were measured by qRT-PCR for the different treatgroups(A)Transfecting inhibitor.(B)Transfecting mimics3.2.2 miR-21 对猪子宫内膜细胞凋亡的影响许多研究都显示，细胞活力的增强或减弱与细胞凋亡增强或减弱有关。而猪子宫内膜细胞的凋亡和胚胎附植密切相关(Lim et al 2018）。为了研究 miR-21 对猪子宫内膜细胞凋亡的影响，分别转染 miR-21 小片段，结果如图 3-4 所示，象限一、二、三、四分别表示晚期凋亡细胞、机械损伤细胞、正常活细胞、早期凋亡细胞，检测细胞凋亡数以早期凋亡和晚期凋亡细胞的总和来判定，结果显示，miR-21inhibitor 组细胞比例显著低于对照组（P<0.05）；而 miR-21 mimic 组细胞与对照组无显著差异（图 3-4），我们猜测 miR-21 本身在正常健康子宫内膜细胞中表达量较高，因此过表达后，其效果并不明显。这些结果表明 miR-21inhibitor 会促进细胞凋
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 周柳瑜;胡明秀;;子宫内膜微刺激术对子宫内膜过薄不孕的治疗效果探究[J];首都食品与医药;2019年04期

2 何凡桂;;绝经后女性的子宫内膜癌与其子宫内膜增厚的病理相关性[J];当代医药论丛;2018年01期

3 郭洁;冯晓丹;程薇薇;;微创子宫内膜去除术治疗异常子宫出血的现状总结[J];现代仪器与医疗;2017年01期

4 帕力旦·阿布力孜;;经阴道补充雌激素对薄型子宫内膜的影响作用分析[J];世界最新医学信息文摘;2017年18期

5 肖进蕾;肖远扬;;超声消融治疗子宫肌瘤对患者子宫内膜形态的影响[J];基因组学与应用生物学;2017年06期

6 商敏;郝增平;;无出血绝经后女性子宫内膜增厚的临床意义初探[J];中国妇产科临床杂志;2017年05期

7 王慈英;廖灿;李冬娇;;诺舒子宫内膜去除术与宫腔镜子宫内膜电切术治疗异常子宫出血的疗效观察[J];医学理论与实践;2016年20期

8 陈玉清;常亚杰;杨欢;;重度宫腔粘连子宫内膜修复中微血管密度及VEGF的表达及其临床意义[J];新医学;2016年10期

9 漆倩荣;杨增明;;子宫内膜接受性研究进展[J];生殖医学杂志;2013年04期

10 黄梅香;黄玉萍;林秋玲;;热球子宫内膜去除术治疗异常子宫出血的远期疗效分析[J];深圳中西医结合杂志;2015年03期

相关博士学位论文 前10条

1 孙婷婷;通过全外显子组测序技术鉴别同时性子宫内膜及卵巢原发双癌与转移性癌[D];北京协和医学院;2019年

2 于璇;子宫内膜机械性剌激对反复种植失败患者子宫内膜容受性的影响及机制研究[D];山东大学;2019年

3 邓洋;PGE_2对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮组织损伤的调控作用研究[D];内蒙古农业大学;2019年

4 李婷婷;内源性PGE_2对大肠杆菌所致奶牛子宫内膜组织损伤的影响[D];内蒙古农业大学;2019年

5 齐家;皮质醇在多囊卵巢综合征患者子宫内膜胰岛素抵抗中的影响及其作用机制[D];上海交通大学;2018年

6 胡世福;含铜宫内节育器致子宫内膜异常出血的机制研究[D];华中科技大学;2019年

7 周芳;前列腺素及其受体在月经发生中对子宫内膜崩解脱落作用机制的研究[D];北京协和医学院;2018年

8 齐莎莎;褪黑素通过Notch1/Numb/Snail信号通路调控子宫内膜相关疾病上皮间质转化的研究[D];山东大学;2018年

9 赵向寨;SPL-A增敏TRAIL诱导的子宫内膜癌细胞凋亡及机制研究[D];河北医科大学;2018年

10 谢张冬;子宫内膜上皮细胞对HCO_3~-的吸收与分泌及宫腔液的pH调控[D];华中科技大学;2018年

相关硕士学位论文 前10条

1 宋俏俏;孕酮对大肠杆菌感染的山羊子宫内膜炎症反应研究[D];扬州大学;2019年

2 南楠;Huc-MSCs外泌体修复子宫内膜机械损伤以及急性应激导致子宫内膜崩解出血作用的初探[D];北京协和医学院;2019年

3 张秀玲;miR-21通过靶向PDCD4调控猪子宫内膜细胞凋亡、迁移的作用机理研究[D];华中农业大学;2019年

4 李丰鑫;负压型子宫内膜取样器筛查子宫内膜病变的临床应用[D];中国医科大学;2019年

5 陈雪娇;绝经后早期阴道出血的病因研究[D];天津医科大学;2018年

6 田甜;机械加载治疗薄型子宫内膜的机制研究[D];天津医科大学;2019年

7 薛军军;奶山羊子宫内膜容受前期和容受期全基因组甲基化差异分析[D];西北农林科技大学;2019年

8 海丽丽;TLR2/4受体途径对奶牛子宫内膜组织中PGE_2合成及组织损伤的作用研究[D];内蒙古农业大学;2019年

9 张超;EP_2受体途径对大肠杆菌所致奶牛子宫内膜组织损伤的影响[D];内蒙古农业大学;2019年

10 王灵芮;EP_4受体途径对大肠杆菌所致奶牛子宫内膜组织损伤的影响[D];内蒙古农业大学;2019年

本文编号：2862737