坦布苏病毒对樱桃谷育成鸭的致病性研究

发布时间：2017-04-05 06:11

  本文关键词：坦布苏病毒对樱桃谷育成鸭的致病性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：自2010年4月以来,我国多个地区肉鸭、蛋鸭养殖区暴发了一种以蛋鸭产蛋量下降和雏鸭神经症状为特征的急性传染病,研究表明该病是由一种新型黄病毒——坦布苏病毒(Tembusu virus,简称TMUV)感染引起的。TMUV感染发病迅速、发病率和死亡率较高,传播速度快、流行范围广,严重威胁我国水禽产业的健康发展,造成了巨大的经济损失。本研究利用实验室分离的鸭源坦布苏病毒,人工感染不同周龄育成鸭,研究不同周龄育成鸭对TMUV的易感性,旨在为坦布苏病毒的防控提供理论依据。本试验将350只樱桃谷后备鸭随机分为14组,每组25只后备鸭,1~7组为试验组,分别于7、10、12、14、16、18和21周龄人工静脉接种TMUV AHQY株病毒液(1.265x105 ELD50),8~14组为对照组,分别于上述对应时间接种相同剂量的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)。攻毒后连续观察20d,每天采集泄殖腔和咽喉棉拭子样品,观察并记录发病情况,分别于攻毒后第2 5、8、12、16和20d随机剖杀试验组和对照组鸭各4只,观察并记录感染鸭的临床症状和剖检变化。无菌采集心脏、肝脏、脾脏、肾脏和脑等器官进行病理组织学、免疫组织化学研究,利用建立的荧光定量RT-PCR方法检测感染鸭的排毒规律和各组织中病毒含量,血清中和试验测定血清中特异性抗体水平,ELISA方法检测血液中细胞因子含量。结果显示,7周龄和21周龄鸭感染TMUV后,部分鸭出现明显症状,而其它周龄组鸭感染TMUV后症状不明显。剖检变化显示,7、18和21周龄组感染鸭呈现不同程度的脑膜充血、出血,心肌水肿、松软,肝脾肿大、出血,病理组织学结果显示,脑小胶质细胞增生,内脏器官细胞肿胀、变性和坏死并伴有炎性细胞浸润,而14~16周龄感染鸭剖检变化和组织微观病变较轻微。免疫组化结果显示,7周龄和21周龄组感染鸭组织中阳性细胞着色深且分布广,14和16周龄组感染鸭组织中阳性细胞少。荧光定量结果显示,7、10和21周龄组感染鸭肾脏、肝脏、脑和卵巢中检测到的病毒拷贝数较多,而14和16周龄组感染鸭上述器官检测到的病毒拷贝数较少;7和21周龄感染组泄殖腔和咽喉拭子样品可以检测到较多的病毒拷贝数,而14和16周龄组感染鸭棉拭子样品中检测到病毒含量较少。感染后第8d所有存活鸭均可产生阳性抗体,14周龄感染鸭的血清中和抗体水平要显著高于其它周龄感染鸭。人工感染第16和18周龄育成鸭的细胞因子含量与对照组相比差异不显著。结论:TMUV对育成鸭的致病性与感染周龄存在部分相关性,7~10周龄、18~21周龄育成鸭对TMUV较易感,而14~16周龄育成鸭对TMUV的抵抗力较强。
【关键词】：坦布苏病毒 樱桃谷育成鸭 周龄 致病性研究
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.32
【目录】：

• 符号说明4-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-25
• 1.1 坦布苏病毒的生物学特性11-15
• 1.1.1 病毒分类学地位11-12
• 1.1.2 形态结构12
• 1.1.3 病毒理化性质和培养特性12-13
• 1.1.4 TMUV基因组结构及编码蛋白13-15
• 1.2 病毒流行病学研究15-16
• 1.3 病毒感染临床症状及病理变化16-17
• 1.3.1 临床症状16
• 1.3.2 病理变化16-17
• 1.4 病毒诊断方法进展17-20
• 1.4.1 临床诊断17
• 1.4.2 实验室诊断17-20
• 1.5 坦布苏病毒感染的防制20-21
• 1.5.1 生物安全防治措施20
• 1.5.2 疫苗预防20-21
• 1.5.3 药物治疗21
• 1.6 免疫组织化学技术21-22
• 1.7 荧光定量PCR技术22-24
• 1.7.1 荧光定量PCR的原理22
• 1.7.2 荧光定量PCR的种类22-24
• 1.8 中和试验24-25
• 1.9 本研究的目的和意义25
• 2 材料与方法25-32
• 2.1 材料25-27
• 2.1.1 病毒与试验动物25-26
• 2.1.2 主要试剂26
• 2.1.3 主要仪器26-27
• 2.1.4 主要溶剂的配制27
• 2.2 方法27-32
• 2.2.1 病毒的增殖27
• 2.2.2 TMUV AHQY株ELD_(50)测定27
• 2.2.3 试验方法27-28
• 2.2.4 病理组织学及免疫组化研究28-30
• 2.2.5 RNA的提取和荧光定量RT-PCR30-32
• 2.2.6 血清中和实验32
• 2.2.7 细胞因子测定32
• 3 结果与分析32-43
• 3.1 TMUV AHQY株的分离与鉴定32-34
• 3.2 TMUV人工感染育成鸭的结果34-35
• 3.2.1 临床症状34
• 3.2.2 剖检变化34-35
• 3.3 组织病理学与免疫组化35-41
• 3.3.1 组织病理学变化35-40
• 3.3.2 免疫组化结果40-41
• 3.4 排毒规律及组织病毒载量检测结果41
• 3.5 血清抗体水平检测结果41-42
• 3.6 血清细胞因子结果42-43
• 4 讨论43-46
• 5 结论46-47
• 参考文献47-55
• 致谢55-56
• 攻读硕士学位期间发表论文情况56

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