双峰驼内脏组织CYP2J基因的表达与分布研究

发布时间：2020-11-06 12:46

　　 CYP2J酶在动物机体内源性物质和外源性化合物代谢过程中扮演着关键的角色。CYP2J通过参与花生四烯酸代谢生成EETs,起到降低血压、抗血栓、促进血管内皮细胞增殖和抑制内皮细胞凋亡等作用。为揭示双峰驼CYP2J基因及其蛋白质在体内不同组织中的表达量与分布情况,开展了本研究。首先,根据Genebank中登录的双峰驼CYP2J基因序列设计一对特异性引物,以ACTB基因为内参,采用SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测双峰驼肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏、血管、胰腺、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和胃等13种组织中CYP2J基因,从基因水平上揭示CYP2J基因在双峰驼不同组织中的相对表达量。其次,根据双峰驼CYP2J氨基酸序列,用分子生物学软件(DNASTAR)筛选出合适的抗原表位氨基酸序列,并据此人工合成抗原多肽制备兔CYP2J抗体。第三,采用Western blot技术检测双峰驼上述13种组织中的CYP2J蛋白相对表达量,从蛋白水平揭示CYP2J酶在双峰驼不同组织中的相对表达量。结果表明:CYP2J基因在双峰驼胰腺组织中的表达量最高,其次是回肠、盲肠、胃、空肠、血管、心脏、肾脏、结肠、肝脏、十二指肠、肺脏和脾脏。所制备的兔抗CYP2J抗体效价高(1:50000)、特异性强和稳定性好,能够满足Western blot检测要求。双峰驼CYP2J蛋白质在肝脏的表达量最高,其次是胰腺、肾脏、胃、空肠、十二指肠、脾脏、血管、盲肠、心脏、肺脏、结肠和回肠。结论:CYP2J基因和蛋白在双峰驼各组织中的相对表达量差异很大,CYP2J基因在双峰驼胰腺组织中的表达量最高,而CYP2J蛋白在双峰驼肝脏组织中的表达量最高。
【学位单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S824
【部分图文】：

图１抗原片段筛选图??Ｆｉｇ．?１?Ａｎｔｉｇｅｎ?ｆｒａｇｍｅｎｔ?ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ??

图2双峰驼CYPZJ杭体纯化质谱图

图３双峰驼ＣＹＰ２Ｊ抗体纯化ＨＰＬＣ色谱图??Ｆｉｇ．３?ＨＰＬＣ?ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?ＣＹＰ２Ｊ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｆｒｏｍ?Ｂａｃｔｒｉａｎ?ｃａｍｅｌ??
【参考文献】

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本文编号：2873157