鬼针草抗伪狂犬病毒的作用研究

发布时间：2020-11-09 13:33

　　 猪伪狂犬病(Porcine Pseudoraibies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PrV)引起猪的一种急性传染病,被认为是对生猪养殖产业经济影响最大的猪病毒病之一。本文将中草药鬼针草提取物从体外和体内两个方面探究其抗伪狂犬病毒的效果,并将其运用于断奶仔猪初步观察其抗病毒的作用及对生产和免疫性能的影响。1、采用水煮醇沉的方法获得鬼针草的粗提物,利用细胞病变观察和CCK-8细胞活力测定结合的方法研究其对PrV感染BHK-21细胞的影响。并通过间接免疫荧光(IFA)、实时荧光定量PCR和原位荧光细胞凋亡检测法,初步探究其抗伪狂犬病毒的机制。结果表明,治疗模式和直接杀病毒模式中,鬼针草粗提物10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL均能明显改善PrV引起的BHK-21细胞病变和活力(p0.001),预防模式没有明显效果(p0.05)。实时荧光定量PCR、IFA及细胞凋亡检测结果均表明鬼针草粗提物抗伪狂犬病毒的机制可能是通过抑制PrV gB基因和蛋白的表达,减少病毒感染诱导造成的细胞凋亡等方式起到保护细胞的作用。2、构建PrV感染小鼠模型,设空白对照组、鬼针草单方提取物低、中、高剂量组、鬼针草复方(鬼针草:甘草:绞股蓝:红车轴草=2:1:1:1)提取物低、中、高剂量组、病毒组和阳性对照组。灌胃7 d后给予小鼠皮下注射10 LD_(50)的病毒液,然后继续给予小鼠灌胃,观察攻毒后5 d内小鼠的死亡情况和临床症状。结果表明,鬼针草可降低死亡率,延迟小鼠的发病时间,改善小鼠发病时的临床症状,且复方效果优于单方。为进一步探讨发酵鬼针草复方对小鼠攻毒的保护效果,设空白对照组、低、中、高剂量发酵鬼针草复方组、病毒组及阳性对照组,给予小鼠饲喂给药,7 d后,小鼠皮下注射10 LD_(50)的病毒液,小鼠继续饲喂给药,观察攻毒后5 d内小鼠的死亡情况和临床症状。结果表明,发酵鬼针草复方组的小鼠发病时临床症状减轻,死亡时间延长,死亡率降低。3、将鬼针草微粉与其他中草药组方发酵,将发酵后的产物作为添加剂以0.5%、1%、2%三个梯度添加于基础日粮中给于断奶仔猪饲喂,观察给药28 d期间断奶仔猪的腹泻率、生长状态、记录采食量和增重量;28 d后空腹采血,分离血清检测总IgG、IFN-γ及伪狂犬病毒、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、蓝耳病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)检出率。结果表明,鬼针草与其他中草药组方发酵的发酵产物能降低腹泻率(P0.05),提高血清中总IgG的含量(P0.001),但对提高断奶仔猪增重量及IFN-γ含量无明显影响(P0.05);同时可降低同群仔猪血清中PRRSV的检出率;由于伪狂犬病病毒血症期较短,未能检测出PrV病毒核酸。综上,鬼针草具有一定的体外和体内抗伪狂犬病毒活性作用,其配伍红车轴草、绞股蓝与甘草的复方发酵制剂可以降低断奶仔猪腹泻率和提高其免疫力。
【学位单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S853.74
【部分图文】：

图 2-1 鬼针草提取物处理 BHK-21 细胞存活率注：与细胞对照相比，***P<0.001；**P<0.01Figure 2-1 Survival rate of BHK-21 cell treated with BPENote: Compared with cell control, ***P<0.001; **P<0.01.3.2 PrV 的 TCID50测定结果表 2-4 PrV 的 TCID50测定和计算（Reed-Muench 法）Table 2-4 TCID50determination and calculation of PrV (Reed-Muench method)毒稀释度细胞病变 累计孔数细胞孔数 病出现细胞病变不出现细胞病变出现细胞病变不出现细胞病变10-18 0 49 0 49 (410-28 0 41 0 41 (410-38 0 33 0 33 (310-48 0 25 0 25 (2

鬼针草抗伪狂犬病毒的作用研究图 2-2 结果表明，与病毒组相比，2.5，5，10 mg/ml 鬼针草提取物和 0.5 mg/mL伐昔洛韦处理 BHK-21 细胞后感染 PrV，细胞存活率与病毒组相比均差异不显著（P>0.05），说明鬼针草提取物及伐昔洛韦提前给药后感染病毒的给药方式不能有效保护 BHK-21 细胞免受 PrV 侵染造成活力下降或死亡。

图 2-2 预防模式 BHK-21 细胞的存活率注：与细胞对照相比，***P<0.001；与病毒组相比，###P<0.001Figure 2-2 Survival rate of BHK-21 cell in the prevention modeNote: Compared with cell control, ***P<0.001; Compared with PrV, ###P<0.001.2 预防模式抗病毒检测结果（CPE）图 2-3 显示病毒组和 2.5，5，10 mg/ml 鬼针草提取物及 0.5 mg/mL 伐昔的细胞病变无明显差异，说明先用鬼针草提取物和伐昔洛韦处理 B不能有效保护其感染 PrV 并产生病变。
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本文编号：2876506