抗菌肽CC31单体肽和串联肽对羔羊小肠生长发育、免疫及盲肠菌群的影响

发布时间：2020-11-09 23:01

　　 羔羊断奶应激是困扰我国养羊业发展的严重问题,抗菌肽具有较小的分子量,能够安全稳定地为自然界各种生物提供保护,其具有独有的破膜杀菌机制以及不易引起细菌产生耐药性的特点,为降低断奶应激提供了新的解决思路。试验采用单因素试验设计方法,选取48只7日龄公羔,根据体重相近原则平均分为4组(每组3个重复,每个重复4只)。单体肽组饲喂添加300 mg/kg单体肽的基础日粮,串联肽组饲喂添加300 mg/kg串联肽的基础日粮,抗生素组饲喂添加300 mg/kg抗生素的基础日粮,空白组饲喂基础日粮,试验期28天。于羔羊14,21,28和35日龄时,在每个重复中随机取1只羔羊屠宰。采用组织学技术研究小肠组织及黏膜形态结构,采用相对荧光定量PCR技术研究小肠上皮紧密连接蛋白基因相对表达量及肝组织中免疫受体及免疫细胞因子基因相对表达量。采用ELISA酶联反应试剂盒检测血清中免疫球蛋白含量,采用高通量测序研究盲肠肠道菌群结构组成。结果显示:1、日粮添加抗菌肽CC31单体肽和串联肽显著增加十二指肠、空肠和回肠绒毛高度、绒腺比及绒毛表面积(P0.05),并显著降低隐窝深度(P0.05)。2、单体肽组显著提高十二指肠ZO-1基因相对表达量(P0.05),单体肽组有提高Claudin-1基因相对表达量的趋势,抗生素组、串联肽组和单体肽组均显著提高了空肠ZO-1基因相对表达量(P0.05),单体肽组和抗生素组显著提高了空肠Claudin-1基因相对表达量(P0.05),串联肽组具有提高空肠Claudin-1基因相对表达量趋势,单体肽组具有提高回肠ZO-1基因相对表达量趋势。3、随着日龄的增长,羔羊血清中Ig A、IgG和IgM含量均显著增加,串联肽组和单体肽组均显著提高了羔羊血清中IgA含量(P0.05),与抗生素组无显著差异(P0.05)。单体肽组显著提高了IgG含量(P0.05),串联肽组具有提高IgG含量的趋势,单体肽组显著提高血清中IgM含量(P0.05),串联肽组具有提高羔羊血清中Ig M含量的趋势。4、单体肽组和串联肽组显著下调了TLR2和TLR4基因相对表达量(P0.05)。单体肽组和串联肽组均显著下调IL-6基因、IL-2基因、IFN-γ基因和TNF-α基因相对表达量(P0.05)。5、羔羊肠道菌群主要由厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)及放线菌门(Actinobacteria)组成。拟杆菌门(Bacteroidetes)在14 d、21 d时,串联肽组和单体肽组显著高于空白组,厚壁菌门(Firmicutes)在35 d时串联肽组和单体肽组显著高于空白组(P0.05),放线菌门(Actinobacteria)在35 d时,单体肽组显著低于空白组(P0.05),变形菌门(Proteobacteria)在14 d时单体肽组具有高于空白组的趋势,在21 d时串联肽组显著高于空白组(P0.05)。试验结果表明:抗菌肽CC31具有促进肠道上皮细胞发育,改善肠道组织形态结构的功能;抗菌肽CC31能够上调肠道上皮紧密连接蛋白基因相对表达量,保障肠道粘膜屏障功能;抗菌肽CC31能够提高羔羊血清中Ig A、IgG和Ig M含量,有助于羔羊机体免疫系统的构建;抗菌肽CC31具有下调羔羊组织中TLR2和TLR4基因相对表达量以及促炎细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ基因相对表达量的作用,降低了羔羊断奶应激引起的炎症反应,有助于羔羊机体免疫系统的建立;抗菌肽CC31对羔羊盲肠肠道菌群结构组成具有一定的影响,具有提高肠道菌群丰度和多样性的作用,并起到提高有益菌群的定植,降低有害菌含量的作用。结论:抗菌肽CC31单体肽和串联肽具有降低羔羊断奶应激影响,保障羔羊肠道健康发育,促进机体免疫系统的建立,改善肠道菌群的作用。单体肽与串联肽相比,单体肽效果较串联肽更好。
【学位单位】：黑龙江八一农垦大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S826.5
【部分图文】：

（JNK）和 IRF 转录因子家族（IRF-5），直接诱导表达促炎症细胞因子；另一条激K 复合体，磷酸化并激活 IκB 激酶，与 NF-κB 结合，由此进行诱导核酸，导致一系列因表达促炎症细胞因子，如 TNF、IL-1、MMP 等，完成信号通路的传导（见图 1-1D88 依赖型信号通路在许多炎症反应中发挥作用，该信号通路在香烟烟雾诱导的肺中扮演了重要的角色[84]。TLR4 的胞内区 TIR 结构域 与 TRAM 相连，作用于 TR活化并与 TRAF6 结合，然后将信号传导至 IRF-3，将其磷酸化后形成同源二聚体核，诱导 IFN 基因表达。TLR4 的信号传导活性受细胞膜中的胆固醇水平调节，进双磷脂（bis(monoacylglycero)phosphate，BMP）的影响。Ciesielska 等（2016）[85]添加 BMP 异构体掺入到巨噬细胞的质膜和胞内囊泡中，能强烈降低 LPS 刺激的（RANTES）的产生，其与控制 RANTES 表达的干扰素调节因子 3（IRF 3）的抑制相比 MYD88 依赖型通路，MYD88 非依赖性通路更为简单一些，然而却具有重要的其诱导产生的 IFN 是一种广谱抗病毒剂，其发挥作用并不是直接杀死或抑制病毒胞表面受体结合，诱导细胞表面产生抗病毒蛋白，提高细胞自身免疫力。

抗菌肽 CC31 单体肽和串联肽对羔羊小肠生长发育、免疫及盲肠菌群的影响谱抑菌活性[115]，阻断了肠道内病原微生物及其产物对肠道上皮紧密连接蛋白的破道称，肠道内革兰氏阴性菌分泌脂多糖（LPS），直接破坏肠道上皮细胞紧密连接，使细胞旁通透性增加，使病原微生物及其代谢产物透过肠道黏膜屏障进入血液循引起各种炎症反应（如图 3-2 所示）。当细胞间紧密连接蛋白被破坏，细胞同样受损正产的蛋白表达分泌系统，从而降低了两种紧密连接蛋白的相对表达量。

第六章 抗菌肽 CC31 单体肽和串联肽对羔羊盲肠肠道菌群结构的影响个样本的Shannon 多样性曲线（图 2-3B）已经达到平坦状态，两图综合可说明本实验的测序深度可反映羔羊盲肠中菌群的多样性，α多样性中Coverage指数均在99.7%以上，说明样品内多样性覆盖率已经达到确保样本信息真实性要求。
【参考文献】

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本文编号：2877077