降低奶牛乳中体细胞可饲用天然植物组方筛选与药理机制

发布时间：2020-11-10 06:34

　　 牛奶体细胞数(SCC)是一个非常重要的指标,它不仅可以用来衡量牛奶的卫生与质量,并且在临床上可以诊断奶牛是否患有隐性乳房炎以及奶牛乳房的健康状况。当奶牛患有隐性乳房炎时,便会造成乳中SCC升高,进而导致奶牛产奶量和乳品质下降等一系列问题,给奶牛养殖业带来巨大损失。最近,农业部在《饲料原料目录》中收录了115种药食同源的中药至可饲用天然植物。这些可饲用天然植物具有传统中草药绿色、毒副作用低等特点,利用其保健功能来调节奶牛的乳房机能,降低牛乳中SCC,改善乳品质,同时还避免了新兽药在申报过程中费用高、周期长的弊端,这种做法将极大的促进奶牛业的健康持续发展。本研究旨在通过试验研究,为临床控制、治疗奶牛隐性乳房炎,降低牛乳中的SCC,提升乳品质提供一个安全有效的可饲用天然植物组方,同时对其抗炎机制作初步探讨,以期为后续试验提供一定理论基础。本试验首先从《饲料原料目录》中选取不同种类的可饲用天然植物,组成4个备选中药组方。然后筛选出SCC50万/mL的奶牛乳区,平均分成5组,每组10个乳区。试验组每天各在饲料中添加饲喂4种中药200 g,连续用药7 d,各组在开始饲喂可饲用天然植物组方的第0,3,5,7 d分别采集各乳区的乳汁,测定体细胞数和乳成分,分析结果确定出最佳可饲用天然植物组方。为了确定最佳可饲用天然植物组方的临床推荐剂量,以及对奶牛血液以及乳汁指标的作用,筛选出SCC50万/mL的奶牛乳区,平均分成4组,每组10个乳区。试验组每天各在饲料中添加饲喂不同剂量的最佳中药组方,连续用药7 d,各组在开始用药的第0,3,5,7 d分别采集各乳区的乳汁,测定各乳区的体细胞数、乳成分,记录每个乳区的日产奶量,分析结果确定临床用药推荐剂量。采集血液和乳液,分离出血清和乳清,使用微板法测定血清中AST、ALT,使用微量酶标法测定乳清中ALP、LDH、NAG,使用比色法测定血清中GSH-Px,使用TBA法测定血清中MDA,使用WST-1法测定血清中SOD,使用ELISA法测定血清、乳清中TNF-α、IL-6。为了研究最佳可饲用天然植物组方降低奶牛SCC的药理机制,本论文通过建立小鼠耳肿胀和足趾肿胀模型进行抗炎试验,探讨了最佳可饲用天然植物组方的抗炎效果。以细菌脂多糖刺激状态良好的RAW264.7细胞建立细胞炎症模型,用不同浓度的最佳可饲用天然植物组方预处理RAW264.7细胞4 h,然后使用细菌脂多糖致炎24 h,使用Griess法测定细胞培养上清液中NO的含量,使用ELISA法测定上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-10的含量。Western-blot法,测定P65和IκBα以及P-P65和P-IκBα蛋白表达水平。试验结果表明,以鱼腥草、党参、益母草和瓜蒌为主药组成的组方Ⅲ,效果最佳,可以显著降低高SCC奶牛乳区乳中的体细胞数(P0.05),提高乳区日产奶量以及乳中乳成分的含量(P0.05)。临床推荐剂量为200 g/头·d;药理学试验显示,最佳可饲用天然植物组方可显著降低奶牛血清当中AST、ALT、MDA、IL-6以及TNF-α的含量(P0.05),提高GSH-PX、SOD含量(P0.05),显著降低奶牛乳清当中ALP、LDH、NAG、IL-6、TNF-α含量(P0.05)。显著降低由二甲苯导致的小鼠耳肿胀以及10%鸡蛋清溶液导致的足趾肿胀的肿胀度、肿胀率、提高肿胀抑制率(P0.05);体外试验表明,当最佳可饲用天然植物组方浓度≤6 mg/mL时,对RAW264.7细胞无明显毒性作用。5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL的最佳组方提取物,均可极显著地抑制LPS诱导RAW264.7细胞后NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6含量的升高(P0.01),极显著降低P65及IκBα的磷酸化水平(P0.01)。并且呈现剂量依赖性。结论:以鱼腥草、党参、益母草和瓜蒌为主药的可饲用天然药物组方党参双草瓜蒌散,可以显著降低高SCC奶牛乳中的体细胞数,改善乳品质,提高产奶量,临床推荐剂量为200 g/头·d。该组方可以显著抑制小鼠急性炎症导致的肿胀,抑制RAW264.7细胞释放NO、TNF-α、IL-1β以及IL-6。提示其抗炎机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活,进而降低了促炎因子的分泌量,进而表现出抗炎活性。
【学位单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S853.7
【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
1 引言
    1.1 奶牛乳房炎的研究进展
        1.1.1 奶牛乳房炎简介
        1.1.2 奶牛乳房炎的病因
        1.1.3 奶牛乳房炎的危害
        1.1.4 奶牛乳房炎的预防和治疗
    1.2 中药防治奶牛乳房炎的作用机理
        1.2.1 抑菌作用
        1.2.2 抗炎作用
        1.2.3 提高免疫机能
        1.2.4 补充营养，提高代谢
    1.3 中药防治奶牛乳房炎的前景
    1.4 研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 奶牛
        2.1.2 小鼠
        2.1.3 细胞
        2.1.4 中药
        2.1.5 主要药品与试剂
        2.1.6 主要仪器与耗材
    2.2 试验方法
        2.2.1 最佳中药组方的筛选
        2.2.2 最佳组方临床推荐剂量的筛选
        2.2.3 最佳组方药理机制研究
    2.3 数据分析
3 结果
    3.1 最佳可饲用天然植物组方的筛选结果
        3.1.1 不同中药组方对泌乳奶牛体细胞数的影响结果
        3.1.2 不同中药组方对泌乳奶牛乳成分的影响
    3.2 最佳组方临床推荐剂量的筛选结果
        3.2.1 不同剂量最佳组方对泌乳奶牛体细胞数的影响
        3.2.2 不同剂量最佳组方对泌乳奶牛乳成分的影响
        3.2.3 不同剂量最佳组方对泌乳奶牛产奶量的影响
        3.2.4 最佳组方临床推荐剂量的确定
    3.3 最佳组方药理机制探讨结果
        3.3.1 最佳组方对奶牛血液和乳液指标的影响
        3.3.2 最佳组方对小鼠体内抗炎试验结果
        3.3.3 最佳中药组方对体外抗炎的影响
4 讨论
    4.1 可饲用天然植物组方对乳中体细胞数的影响
    4.2 可饲用天然植物组方对乳成分的影响
    4.3 可饲用天然植物组方的抗炎作用
        4.3.1 可饲用天然植物组方的体内抗炎效果
        4.3.2 可饲用天然植物组方的体外抗炎效果
    4.4 可饲用天然植物组方对奶牛理化功能的影响
        4.4.1 可饲用天然植物组方对奶牛血液指标的影响
        4.4.2 可饲用天然植物组方对奶牛乳汁指标的影响
    4.5 可饲用天然植物组方方解
5 结论
参考文献
在读期间发表的论文情况
作者简介
致谢
详细摘要

【参考文献】

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本文编号：2877604